Bakteri Listeria monocytogenes dan Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri patogen yang harus dihambat atau dibunuh pertumbuhannya menggunakan senyawa antibakteri. Sargassum sp. merupakan salah satu jenis rumput laut cokelat yang memiliki komponen senyawa bioaktif yang dapat berperan sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh komponen bioaktif dan aktivitas antibakteri ekstrak Sargassum plagyophyllum. Penelitian ini terdiri dari maserasi rumput laut S. plagyophyllum dan karakterisasi ekstrak yang meliputi screening fitokimia dan analisis antibakteri gram positif dan negatif pada konsentrasi ekstrak yang berbeda yaitu 2, 4, dan 6% w/v. Ekstrak metanol S. plagyophyllum memiliki rendemen 1,32±0,04% dan mengandung senyawa bioaktif alkaloid, steroid, saponin, dan fenolik. Jika dilihat dari aktivitas antibakteri, diperoleh bahwa ekstrak S. plagyophyllum memiliki zona hambat terhadap bakteri gram positif (L. monocytogenes) dan bakteri gram negatif (P. aeruginosa), namun diameter penghambatan pertumbuhan bakteri gram negatif (6,67±0,58 mm) lebih besar dibandingkan dengan bakteri gram positif (4,67±0,58 mm) pada konsentrasi ekstrak tertinggi (6%).