๋ณธ ์ฐ๊ตฌ์์๋ ์ ์ฃผ ์ฌ๋ํ๋์ ๋ชจ์์ ๊ด์ฌํ๋ MC1R ์ ์ ์๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ, ๋ชจ์์ ์ ์ ๋น๋๋ฅผ ์กฐ์ฌํจ์ผ๋ก์จ, ์ ์ฃผ ์ฌ๋ํ๋๊ตฐ ํ๋ณด๋ฅผ ์ํ ์ ๋ฐ๊ณํ ์๋ฆฝ์ ๊ธฐ์ด์๋ฃ๋ฅผ ์ ๊ณตํ๊ณ ์ ์ํํ์๋ค. ๊ณต์๋๋ฌผ์ ๋๋๋ ์ด์ค, ๋์ํฌ์
, ๋๋ก ๊ฐ ํ์ข
๋ณ 20๋์ ์ ์ฃผํ๋ 93๋ ๋ฑ ์ด 153๋๋ฅผ ๊ณต์ํ์ฌ ์ํํ์๋ค. ํ์ข
๋ณ MC1R ์ ์ ์ํ์ ์ค์ ํ๊ธฐ ์ํ์ฌ genbank์ ๋ฑ๋ก๋์ด ์๋ ๋ผ์ง MC1R ์ ์ ์(AF181964)๋ฅผ ์ฐธ๊ณ ๋ก ํ์ฌ ๋ ์์ primer (MERL1-EPIG2, EPIG1-EPIG3)๋ฅผ ์ ์ PCR ์ฆํญ์ ์ํํ์๋ค. ๋จผ์ primer MERL1-EPIG2๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ 428bp์ PCR ์ฐ๋ฌผ์ ์ป์์ผ๋ฉฐ, primer EPIG1-EPIG3๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ 405bp์ PCR์ฐ๋ฌผ์ ์ป์๋ค. ์ด๋ค ์ฆํญ๋ PCR ์ฐ๋ฌผ์ ์๋ก ๋ค๋ฅธ 2๊ฐ์ ์ ํํจ์๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ PCR-RFLP๋ฅผ ์ค์ํ์๋ค. ๋จผ์ primer MERL1-EPIG2๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ฆํญํ 428bp์ PCR์ฐ๋ฌผ์ ์ ํํจ์ BspHโ
(TCATG|A)์ ์ด์ฉํ์ฌ ์ ๋จํ์์ผ๋ฉฐ, primer EPIG1-EPIG3์ผ๋ก ์ฆํญํ 405bp์ PCR์ฐ๋ฌผ์ ์ ํํจ์ Accโ
ก(CGC|G)๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ ๋จํ์๋ค. ์ด๋ค ์ ๋จ๋ DNA ๋จํธ์ TBE buffer์์ ์ ๊ธฐ์๋ ํ EtBr๋ก ์ผ์ํ๊ฑฐ๋ Silver stain ์ผ์์ ํ์ฌ ๋คํํ์์ ๊ด์ฐฐํ์์ผ๋ฉฐ, ๋ณธ ์ฐ๊ตฌ์ ๊ฒฐ๊ณผ๋ฅผ ์์ฝํ๋ฉด ๋ค์๊ณผ ๊ฐ๋ค. 1. ์ ํํจ์ BspHโ
์ ์ด์ฉํ์ฌ PCR-RFLP์ ์ํํ ๊ฒฐ๊ณผ ๋ฐฑ์์ ๋๋๋ ์ด์ค์ ๋์ํฌ์
๋ ์ ๊ฐ์ฒด ๋ชจ๋๊ฐ 2๊ฐ์ ๋ฐด๋(256bp, 172bp)๊ฐ ํ์ธ๋์์ผ๋ฉฐ, ๋๋ก์ ์ ๋จ๋์ง ์์ ํ๋์ ๋ฐด๋(428bp)๊ฐ ํ์ธ ๋์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ ์ ์ฃผ ํ๋์์๋ 3๊ฐ์ ์๋ก ๋ค๋ฅธ ํํ์ ๋ฐด๋๊ฐ ๋ฐ๊ฒฌ๋์๋๋ฐ, ์ ์ฒด 93๋์ค ๋ฐด๋๊ฐ ํ๋์ธ ๊ฐ์ฒด๋(428bp)๋ 29๋(31.2%), ๋ฐด๋๊ฐ ๋ ๊ฐ์ธ ๊ฐ์ฒด๋(256bp, 172bp)๋ 19๋(20.4%), ๋ฐด๋๊ฐ 3๊ฐ์ธ(428bp, 256bp, 172bp) ๊ฐ์ฒด๋ ์ ์ฒด์ ์ ๋ฐ ์ ๋์ธ 45๋(48.4%)์ด์๋ค. 2. Accโ
ก๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ PCR-RFLP๋ฅผ ์ค์ํ ๊ฒฐ๊ณผ ๋๋๋ ์ด์ค์ ๋์ํฌ์
์ข
์์๋ 2๊ฐ์ ๋ฐด๋(222bp, 183)๊ฐ ํ์ธ ๋์์ผ๋ฉฐ, ๋๋ก์ ํ ๊ฐ์ ๋ฐด๋(405bp)๋ง์ด ๊ด์ฐฐ๋์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ ์ ์ฃผํ๋์์๋ 3๊ฐ์ ์๋ก ๋ค๋ฅธ ํํ์ ๋ฐด๋๊ฐ ํ์ธ๋์์ผ๋ฉฐ, ๋ถํฌ๋น๋๋ BspHโ
์ ์ด์ฉํ PCR- RFLP ๊ฒฐ๊ณผ์ ๋์ผํ์๋ค. 3. ์ด์์ ๊ฒฐ๊ณผ๋ฅผ MC1R ์ ์ ์ํ์ผ๋ก ๋ถ๋ฅํ๋ฉด ๋ฐฑ์ํ์ข
์ธ ๋๋๋ ์ด์ค์ ๋์ํฌ์
ํ์ข
์ MC1R*3 allele์ด์์ผ๋ฉฐ, ์ ์์ ๋๋ก์ MC1R*4 allele๋ก์ ๋์
์ข
์ ๋ชจ์์ ์ ์๋ ํ๊ฐ์ง ํํ๋ก ๊ณ ์ ๋์ด ์์๋ค. ๊ทธ๋ฌ๋ ์ ์ฃผ ์ฌ๋ํ๋์ ์์ด์ MC1R*2 allele๊ณผ MC1R*3 allele ๋ชจ๋ ๋ค ๋ํ๋ฌ์ผ๋ฉฐ, ๋๋ถ๋ถ์ ์ด๋ค์ ํคํ
๋ก ํํ์๋ค. ๋ฐ๋ผ์ ์ ์ฃผ ์ฌ๋ํ๋์ ๋ชจ์๊ณ ์ ์ ์ํ์ฌ ์ข
๋ชจ๋ ์ ์ ์ MC1R ์ ์ ์๋ฅผ ์ด์ฉํ๋ฉด, ์งง์ ๊ธฐ๊ฐ ๋ด์ ๋ชจ์์ด ๊ณ ์ ๋ ๊ฒ์ผ๋ก ์ถ์ ๋๋ฉฐ, ๋ช
ํํ ์ ์ ์์ ๊ตฌ๋ช
์ ์ํด์๋ agouti ์ ์ ์์ ์ถ๊ฐ ์ฐ๊ตฌ๊ฐ ํ์ํ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ค. This study was conducted to investigate the genotypes and frequencies of Melanocortin 1 Receptor(MC1R) genes in pigs which plays a central role in regulation of eumelanin (black/brown) and phaeomelanin(red/yellow) pigment synthesis within the mammalian melanocytes. Four different breeds of pigs(20 Landrace, 20 Yorkshire, 20 Duroc, and 93 Jeju native black pigs) were used and PCR-RFLP analysis of MC1R gene was also carried out. Two regions of MC1R genes (428bp and 405bp) were amplified using two specific primers (MERL1-EPIG2, EPIG1-EPIG3), respectively and MC1R allele were determined using 2 restriction enzymes (BspHโ
, Accโ
ก). The results of this experiment indicated that MC1R allelic type in Landrace, Large Yorkshire and Duroc were MC1R *2 (Ep), MC1R *2 (Ep), MC1R *4 (e), respectively. However, various allelic types of MC1R genes were detected in Jeju native black pigs. MC1R allelic type of Jeju black pigs was MC1R*2 type as in Meishan and Large black breeds or MC1R*3 type as in Hampshire and Berkshire breeds and the gene frequencies of ED1 and ED2 were 0.554 and 0.446 in average.