Measurement of apoptosis using M30 in culture media of cell lines treated with anti-cancer agents

Abstract

목적: 부인종양에서 실시되는 신보조항암화학요법의 효율성을 증가시키기 위해서는 약제들에 대한 반응을 조기에 예측할 수있는 측정법이 절실히 요구되고 있다. 본 연구에서는 부인종양의 치료에 흔히 사용되는 항암화학요법제의 투여 후에 배양된 세포들과 이들의 배양액내에서 유발된 고사의 정도를 M30 항원을 이용하여 측정함으로써 약제에 대한 반응의 생화학적 지표로서 사용 가능성이 있는지를 알아보았다. 연구 방법: 배양한 HeLa와 OVCAR-3 세포주에 paclitaxel, cisplatin 및 camptothecin의 저농도와 고농도를 각각 투여한 후 수확한 세포들과 배양액내에서 면역형광염색법과 ELISA에 의해 M30 항원을 측정하였다. 결과: 세포질과 배양액내에서 M30 항원의 정도를 각각 측정한 결과는 비투여 대조군으로부터 항암요법제의 투여 농도가 저농도와 고농도로 증가됨에 따라 M30 항원의 수준이 점차적으로 유의하게 증가함을 관찰하였다. HeLa와 OVCAR-3 세포들에서 M30-fluoresein isothiocyanate (FITC)의 면역형광이 양성인 세포들은 대조군에서 각각 4.3%와 4.07%였다. 약제의 농도 (저농도 vs 고농도)에 따라 paclitaxel의 경우에는 18.61%와 18.6% vs 34.87%와 32.63%로 증가되었고, cisplatin의 경우에는 17.87%와 16.83% vs 32.38%와 32%로 증가되었으며, camptothecin의 경우에는 17.87%와 16.83% vs 32.38%와 32%로 점차 유의하게 증가하는 모습이 괄찰되었다 (P<0.001). 또한 HeLa와 OVCAR-3 세포들의 배양액내에서 ELISA에 의해 측정된 M30 항원의 값은 대조군에서 각각 53.03 U/L와 86 U/L이었다. 약제의 농도 (저농도 vs 고농도)에 따라 paclitaxel의 경우에는 101.53 U/L와 114 U/L vs 355.59 U/L와 412.04 U/L이었고, cisplatin의 경우에는 79.84 U/L와 125.44 U/L vs 327.64 U/L와 385.09 U/L이었으며, camptothecin의 경우에는 88.41 U/L와 108.42 U/L vs 295.005 U/L와 263.1 U/L로 증가함을 관찰하였다 (P<0.001). 결론: 본 연구를 통해 HeLa와 OVCAR-3 세포주에서 paclitaxel, cisplatin과 camptothecin을 투여한 후 수확한 세포들과 배양액내에서 고사의 지표로서 측정한 M30 항원이 증가한 결과들은 암세포의 항암요법제에 대한 감수성의 조기 평가에 유용할 것으로 생각되었다.