Inhibition effect of P27 tumor suppressor gene transfection on human Tenon's fibroblast cells

Abstract

目的 探讨阳离子脂质体介导的P27抑癌基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增生的抑制作用.方法 收集斜视患者矫正手术过程中获取的球筋膜囊组织制备成组织块,采用贴壁法在DMEM+质量分数10%胎牛血清培养液中进行培养和传代.采用脂质体介导的方法,将构建的增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-N1 P27真核表达质粒转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞为pEGFP-N1 P27转染组,同时以重组质粒pEGFP-N1的空质粒转染组为空载体组,另设部分未转染的成纤维细胞为未转染组.Western blot法检测P27蛋白在人眼球筋膜囊成纤维细胞中的表达,用流式细胞技术进行细胞周期分析,MTT法检测P27基因对培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞活性的影响,检测值以细胞的吸光度(A490)值表示.结果 荧光倒置显微镜下见转染成功的成纤维细胞呈绿色荧光.Western blot检测显示,pEGFP-N1 P27转染组中可见宽大的蛋白条带,证实人眼球筋膜囊成纤维细胞在蛋白水平表达P27基因.细胞周期分析结果表明,pEGFP-N1 P27转染组73.16%的人眼球筋膜囊成纤维细胞处于G0-G1期,26.84%处于S期,而空载体组的人眼球筋膜囊成纤维细胞在G0-G1期、S期者分别为63.29%和58.16%,未转染组分别为36.71%和41.84%.MTT法检测表明,pEGFP-N1 P27转染组人眼球筋膜囊成纤维细胞的A490值为0.079±0.054,明显低于空载体组的0.127±0.106和未转染组的0.180±0.007,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.011).结论 转染的P27基因对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增生具有抑制作用,并能够抑制成纤维细胞的活性。