Anti-proliferative effect in epithelial ovarian cancer cells by MEK Inhibitor AZD6244

Abstract

목적: 상피성 난소암 세포에서 세포증식과 생존에 관여하는 ERK 경로의 기초 활성도를 조사하고, MEK 억제제인 AZD6244가 난소암 세포의 증식과 세포주기, 염증성 싸이토카인의 생성에 미치는 영향과 AZD6244를 파클리탁셀과 병합치료를 하였을 때 세포독성 효과의 증강이 있는 지를 알아보고자 하였다. 연구 방법: 난소암 환자의 복수에서 분리한 일차세포와 확립되어진 난소암 세포주를 각각 AZD6244 (0.1-10 μM)를 24, 48, 72시간동안 치료하였다. Cell viability는 CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay를 통해서, caspase 활성도는 Caspase-Glo assay를 이용하였다. 싸이토카인의 분석은 세포배양 후 배양액의 상층액을 채취하여 Luminex 200 system을 이용하여 측정하였고, flow cytometry를 이용해 세포주기를 분석하였으며, p-ERK와 cyclin D1은 western blot 분석을 하였다. 결과: AZD6244는 기초 p-ERK 활성도가 높은 세포나 낮은 세포 모두에서 p-ERK를 억제하였다. AZD6244는 p-ERK의 고발현 세포 (A2780, 01-28, R454)에서 치료농도와 치료기간에 비례하여 효과적으로 증식억제를 보였다. 하지만 p-ERK의 저발현 세포 (CP70, R182)에서는 큰 차이를 보이지 않았다. AZD6244에 민감하게 세포증식의 억제반응을 보인 A2780 세포에서도 caspase-3/7 활성도는 유의한 증가가 관찰되지 않았다. AZD6244는 IL-6, IL-8, MCP-1, GM-CSF를 감소시켰다. 파클리탁셀과 AZD6244의 병합요법은 파클리탁셀에 의한 ERK 경로의 활성화를 AZD6244에 의해 효과적으로 상쇄시키며, 세포독성 효과의 유의한 증강이 나타났다. 결론: AZD6244는 p-ERK의 고발현 세포에서 효과적으로 세포증식 억제효과를 보이며, 파클리탁셀과 AZD6244의 병합요법은 난소암 세포에서 유의한 세포고사를 유도하며 AZD6244에 의한 ERK 경로의 억제가 파클리탁셀의 세포독성 효과를 증강시키는 데에 관여함을 보여준다.