Abstract
In order to enhance the differentiation of induced pluripotent cells into cardiomyocytes, we compared two methods of embryoid bodies formation: differentiation in rotating suspension culture and formation of embryoid bodies from a predetermined number of pluripotent stem cells in microwells of AggreWell plates. We used transgenic murine induced pluripotent stem cell line AT25. Cell line expressed IRES-flanked enhanced green fluorescent protein (eGFP) under the control of cardiac alpha myosin heavy chain promoter (αMHC). We applied flow cytometry and fluorescence microscopyin order to test the efficiency of differentiation processes. Thus, differentiation of pluripotent stem cells in AggreWell plates without adding differentiation factors was more effective than differentiation in rotating suspension culture. However, we obtained the most amounts of cardiomyocytes on the 11-th day in rotating suspension culture with ascorbic acid, after we applied dorsomorfin, DMSO, ascorbic acid, G-CSF with the above-mentioned methods. The amount of GFP + cells was 2,71 ± 0,07%.
Highlights
Щоб підвищити ефективність диференціювання індукованих плюрипотентніх клітин миші в кардіоміоцити, ми порівняли два методи отримання ембріоїдних тілець: диференціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та формування ембріоїдних тілець визначеного розміру в мікролунках AggreWell планшет
In order to enhance the differentiation of induced pluripotent cells into cardiomyocytes
We applied flow cytometry and fluorescence microscopyin order to test the efficiency of differentiation processes
Summary
Щоб підвищити ефективність диференціювання індукованих плюрипотентніх клітин миші в кардіоміоцити, ми порівняли два методи отримання ембріоїдних тілець: диференціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та формування ембріоїдних тілець визначеного розміру в мікролунках AggreWell планшет. Кількість ЕТ, отриманих з плюрипотентних стовбурових клітин шляхом їх культивування в СО2-інкубаторі з додаванням середовища диференціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням становила 15000 – 20000 на одну 10 см чашку Петрі, що в десятки разів перевищувало кількість ЕТ, отриманих з стовбурових клітин спеціалізованих планшетах, де з однієї лунки можна отримати 1200 ЕТ, а загалом з планшети можна отримати до 9600 ЕТ. ДМСО, аскорбінової кислоти, G-CSF під час дифернціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та в спеціалізованих планшетах з мікролунками найбільшу кількість кардіоміоцитів отримали на 11-у добу дифернціювання методом суспензійної культури з додаванням аскорбінової кислоти. Methods for inducing embryoid body formation: in vitro differentiation system of embryonic stem cells / H. E.Willbold [et al.] // Cytotherapy. – 2003. – Vol., N 5. – P.399–413.Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14578102
Sign-in/Register to view highlights & summary 
Published Version (
Free)
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call