SUMMARY Four sunflower species, Helianthus annuus , H. argophyllus , H. debilis and H. tuberosus , were characterized at the molecular level using the plastid trnH-psbA intergenic spacer. The trnH-psbA sequence was selected with the aim of developing a “DNA barcode” system (Kress et al. , 2005) as a tool for species and specimen identification. The plastid region was PCR amplified with specific primers and sequenced with an ABI Prism 3730 Automated DNA sequencer. Intraspecific and interspecific sequence variation was evaluated to assess the resolution of the technique. Sequencing of both forward and reverse strands allowed for a high base calling accuracy and overcame the problem of polymerase slippage within microsatellite regions. After sequence editing, a very low (or absent) intraspecific variability was detected, whereas interspecific variability due to SNPs, indels and SSR length was sufficient for an unambiguous identification of each species. RESUMEN Fue hecha la caracterización de cuatro especies de girasol, Helianthus annuus , H. argophyllus , H. debilis y H. tuberosus , a nivel molecular, por la técnica ’plastid trnH-psbA intergenic spacer’. La secuencia trnH-psbA fue elegida con el objetivo de crear el sistema de “código de barras DNA” (Kress et al. , 2005), que serviría como herramienta para la identificación de las especies vegetales y muestras. La región plastidial está fortificada con la técnica PCR junto con la utilización de los “primers” específicos y secuencionado en el secuenciador automático de DNA “ABI Prism 3730”. La calificación de variabilidad de las secuencias de intra- e interespecies fue realizada con el fin de calificar la precisión de la técnica utilizada. El secuencionamiento de las partes de DNA en las dos direcciones, fue satisfactoriamente exacto, y fue superado el problema de distorsión de la imagen dentro de las regiones microsatélites. Tras la ordenación de las secuencias, la determinada variabilidad de interespecies era baja o no existía. La variabilidad de interespecies SNP, de los fragmentos indel y de longitud de los fragmentos SSR, era suficiente para la identificación irrebatible de cada especie por separado. RÉSUMÉ Les quatre espèces de tournesol, Helianthus annuus , H. argophyllus , H. debilis et H. tuberosus ont été caractérisées au niveau moléculaire par l’espaceur intergénique plastide trnH-psbA. La séquence trnH-psbA a été choisie dans le but de développer un système de „code-barres ADN“ (Kress et al. , 2005) comme outil d’identification d’espèces et d’échantillons. La région plastide a été amplifiée par la méthode PCR avec des amorces spécifiques et séquencée avec un séquenceur ADN automatique “ABI prisme 3730”. La variation de séquence intra et interspécifique a été évaluée pour déterminer la précision de la technique utilisée. Le séquençage des parties d’ADN dans les deux directions a été suffisamment exact et le problème de dérapage polymérase à l’intérieur des régions microsatellites a été maîtrisé. Après organisation de la séquence, une variabilité interspécifique faible ou inexistante a été détectée tandis que la variabilité interspécifique due aux SNP, indels et longueur de SSR suffisait à identifier sans ambiguïté chaque espèce.