Nine strains of the genus Kluyveromyces were screened for ß-galactosidase activity in synthetic and whey media. Three strains exhibiting highest enzyme activity in synthetic media were transferred to whey media. The cell mass and enzyme activity per mg dry weight in whey medium was higher than in synthetic media. K. marxianus NCYC 1424 was found to excrete elevated quantities of the enzyme when cultivated in whey medium. The optimum initial pH of whey for enzyme production was 4.5 for K. fragilis 732 and K. lactis CCY 26-12-3, whereas K. marxianus NCYC 1424 had two optimum initial pH 3.5, 6.0. Optimum conditions for lactase extraction from the fresh yeast K. marxianus NCYC 1424 were found as follows: autolysis by chlorophorm or toluene 2% (v/v) for 12 h at 30 °C in 0.1 M potassium phosphate buffer, pH 7.0, containing 0.1 mM manganese chloride and 0.5 mM magnesium sulfate. Freezing and thawing the cells before solvent-autolysis increased the recovery of the enzyme. Neun Stämme der Gattung Kluyveromyces wurden auf ihre ß-Galactosidaseaktivität in synthetischen und Molkemedien hin untersucht. Drei Stämme mit der höchsten Enzymaktivität im synthetischen Medium wurden ins Molkemedium überführt. Sowohl die Zelldichte als auch die Enzymaktivität pro mg Trockengewicht war im Molkemedium höher als im synthetischen. K. marxianus NCYC 1424 war fähig, höhere Enzymmengen auszuscheiden, bei Kultivierung im Molkemedium. Der optimale Anfangs-pH-Wert der Molke für die Enzympröduktion der Hefen lag bei 4,5 für K. fragilis 732 und K. lactis CCY 26-12-3, während bei K. marxianus NCYC 1424 zwei optimale pH-Werte (3,5 und 6,0) beobachtet wurden. Folgende Bedingungen erwiesen sich für die Lactaseextraktion aus der frischen Hefe-K. marxianus NCYC 1424 als optimal: Autolyse durch Chloroform oder Toluol 2% (v/v) 12h bei 30°C in 0,1 M Kaliumphosphatpuffer bei einem pH von 7,0, in 0,1 mM Manganchlorid und 0,5 mM Magnesiumsulfat. Gefrieren und Auftauen der Zellen vor der Lösungsmittel-Autolyse erhöhte die Enzymausbeute.