본 연구는 3종류의 B. subtilis 균주를 이용하여 제조한 생균제를 산란계 사료에 급여시 난 생산성, 난질, 난황 내 콜레스테롤, 장 내미생물 조성 및 경골 내 성상에 미치는 영향을 조사하였다. 76주령의 Hy-Line Variety Brown 산란계 160수를 공시하여 모두 4개 처리구에 4반복(반복당 10수)로 임의배치 후 6주간의 사양실험을 실시하였다. 산란계용 사료는 옥수수 대두박을 기초로 하여 대사에너지 2,700 kcal/kg와 조단백질 15.5%인 일반 사료 급여구를 대조구로 하였으며, (Tl) 처리구에는 B. subtilis Ch3을 0.05%, (T2) 처리구에는 B. subtilis Ch3 + B. subtilis W1 혼합제제를 0.05%, (T3) 처리구에는 시판되고 있는 B. subtilis 제품을 0.05% 수준으로 대조구 사료에 각각 혼합하여 급여하였다. 실험기간 동안의 난 생산성, 수당 사료섭취량, 난중 및 일 산란량 모두 변화가 나타나지 않았다. 난각 강도와 Haugh unit에서는 대조구와 비교하여 처리구에서 개선되었으며 (P<0.05), 간 내 GOT 및 GPT 효소는 처리구 간에 변화가 관찰되지 않았다. 맹장 내 총 균수와 lactic acid bacteria의 균수가 대조구와 비교하여 처리구에서 유의하게 개선되었다(P<0.05). 하지만 Coliforms 균수는 처리 간에 변화가 나타나지 않았다. 난황과 혈액 내 콜레스테롤 농도는 대조구와 비교하여 처리구에서 감소하였다(P<0.05). 또한 혈액 내 인지질도 대조구에 비교하여 처리구에서 감소하는 경향이 나타났다(P<0.05). 경골 파쇄강도는 처리간에 차이가 없었으나, 경골 내 회분 함량은 대조구와 비교하여 모든 실험구에서 개선시키는 결과가 관찰되었다 (P<0.05). 따라서 본 실험은 산란후기 사료 내 각각의 B. subtilis 균주를 첨가 급여 하였을 때 난각 강도와 Haugh unit를 개선시키는 효과가 관찰되었고 장내의 총 균수와 유산균 수를 증가시킴으로써 유리한 장 내 환경으로 개선시켰으며 또한 난황과 혈액 내 콜레스테롤을 감소시키는 효과가 나타났다. 또한 각각 3종류의 B. subtilis 첨가 급여 효과로 경골 내 회분 함량을 증가시킨 결과로 보아 Ca과 P과 같은 무기질 영양소의 체내 대사 이용률이 개선될 가능성이 시사되었다. 이와 같은 측면에 접근하여 B. subtilis의 수준별 첨가로 인한 혈액 및 경골의 Ca과 P의 축적률 변화와 사료 내 하향 수준의 무기질 공급 등의 추후 연구조사가 이뤄져야 할 가치가 있다고 판단된다. The objective of this study was to investigate the effects of three strains of Bacillus subtilis (B. subtilis) supplemented to diets on egg production, egg quality, egg yolk cholesterol levels, the profile of cecal microflora, and tibia characteristics in laying hens. One hundred sixty 76-week-old Hy-Line Brown layers were randomly divided into 4 groups with 4 replicates per group (10 birds per replicate). Birds in the control group were fed a corn-soybean meal based diet. The remaining three treated groups were fed the control diet containing either 0.05% B. subtilis Ch3 (T1), 0.05% B. subtilis Ch3 + B. subtilis W1 (T2) or 0.05% B. subtilis commercial product (T3) for 6 weeks, respectively. There were no differences in feed intake, egg weight, egg production and egg mass among the groups. The dietary supplementation of B. subtilis improved eggshell strength and Haugh units compared to those of control (P<0.05). The activities of GOT and GPT in serum were not also affected by the dietary treatments. The population of total microbes and lactic acid bacteria in cecum were significantly increased by the dietary B. subtilis (P<0.05), but not the coliforms. The cholesterol concentration in egg yolk and serum in the treated groups were significantly decreased compared to those of control (P<0.05). Also, The levels of phospholipids in serum were significantly decreased compared to those of control (P<0.05). The supplementation of three strains of B. subtilis to diets significantly increased the contents of tibia ash compared to that of control (P<0.05). Thus, this study showed significant improvements in egg quality, such as eggshell strength and Haugh unit, by dietary B. subtilis strains. The B. subtilis strains added to the diets modulated the profiles of cecal microflora, reflecting beneficial effects in laying hens.