리놀렌산(C18:3)과 리놀산(C18:2)의 biohydrogenation 과 반추위 내에서의 이들 지방산의 bypass를 검토하기 위하여 3 구로 나누어 티모시 조사료를 반추위액과 함께 in vitro상에서 39℃, 0, 3, 6, 9, 24, 36 시간 동안 혐기 배양 시험을 하였다. 첫번째 시험의 목적은 C18:2과 C18:3의 in vitro biohydrogenation에 대한 조사료의 성장 단계(stem elongation, early heading, late heading, early flowering)와 질소 시비(0 and 120kg N ha-1)의 영향을 시험하는 것이었다. 수소첨가가능분획(hydrogenable fraction), C18:2과 C18:3의 효과적인 소실과 bypass는 stem elongation 시 수확된 티모시에서 높았고, 성숙함에 따라 일정하게 감소하였다. 질소시비구는 C18:3의 수소첨가가능분획, C18:2과 C18:3의 효과적인 소실과 bypass가 증가하였다. 그러나 C18:2과 C18:3의 소실율은 성숙과 질소시비(P≻0.1)에 의해 영향을 받지 않았다. 2번째 시험에서는 in vitro C18:2과 C18:3 biohydrogenation에 대한 티모시 보존 방법의 영향을 보았다. 사일리지는 C18:2과 C18:3를 가장 효과적으로 소실시켰으며, 건초는 가장 효과가 낮았다. C18:2과 C18:3의 biohydrogenation 된 양은 건초에서 보다 헤일리지와 사일리지에서 더 높았다. 티모시 헤일리지와 비교하였을 때 C18:3의 bypass는 신선 목초, 시든풀, 건초에서 더 높았다. C18:2의 bypass는 건초와 헤일리지에 비해 신선목초와 사일리지가 더 높았다. 3번째 시험에서는 C18:2과 C18:3의 소거와 bypass에 대한 티모시 헤일리지와 사일리지에 대한 개미산 첨가와 Lactobacillus plantarum 접종의 효과를 검토하였다. 개미산의 첨가는 헤일리지와 사일리지에 있어서 C18:3의 biohydrogenation 비율을 증가시켰으나 사일리지에 있어서 C18:2의 수소첨가 가능분획을 감소시켰다. 이러한 3가지 배양구의 결과는 티모시에 있어 C18:2과 C18:3의 수소첨가 가능분획과 bypass가 성숙도에 따라 감소하였고 질소시비에 따라 증가하였음을 보여 준다. 헤일리지와 사일리지에서 건초에서 보다 C18:2과 C18:3의 더 많은 양이 biohydrogenation 되었으며 C18:3의 반추위 소실은 헤일리지에서 보다 신선목초, 시든풀, 건초에서 더 높았다. In vitro anaerobic incubations of timothy (Phleum pretense L.) forage with bovine rumen fluid were conducted at 39℃ for 0, 3, 6, 9, 24, and 36 h in three trials to examine the biohy- drogenation of linolenic (C18:3) and linoleic acids (C18:2) and their bypass from the rumen. The objectives of the first trial was to study the effect of growth stage (stem elongation, early heading, late heading, and early flowering) and N-fertilization (0 and 120 kg N ha-1) on in vitro biohydrogenation of C18:2 and C18:3. The hydrogenable fraction, the effective disappearance and the bypass of C18:2 and C18:3 were high in timothy harvested at stem elongation, and decr- ease linearly with maturity. The N-fertilization increased the hydrogenable fraction of C18:3, the effective disappearance and the bypass of C18:2 and C18:3. However, the rate of disappearance of C18:2 and C18:3 were not affected by maturity and N-fertilization (P>0.1). In trial 2, the effect of timothy conservation method on in vitro C18:2 and C18:3 biohydrogenation was determined. Silage had the highest effective disappearance of C18:2 and C18:3, and grass hay had lowest one. The amounts of C18:2 and C18:3 biohydrogenated were higher in haylage and silage than in grass hay. Comparative to haylage timothy, the bypass of C18:3 was higher in fresh grass, wilted grass and grass hay. The bypass of C18:2 was higher in fresh grass and silage in comparison to grass hay and haylage. In trial 3, the effects of formic acid and Lactobacillus plantarum inoculum addition to timothy haylage and silage on C18:2 and C18:3 disappearance and bypass were studied. Haylage and silage additives had no effect (P>0.1) on effective disappearance and bypass of C18:2 and C18:3. The addition of formic acid increased the rate of biohydrogenation of C18:3 in haylage and silage, but it decreased the hydrogenable fraction of C18:2 in silage. The results of these three incubation trials show that the hydrogenable fraction and the bypass of C18:2 and C18:3 in timothy decreased with maturity and increased with N-fertilization. Higher amount of C18:2 and C18:3 were biohydrogenated in haylage and silage than in grass hay, and C18:3 ruminal disappearance was higher in fresh grass, wilted grass and grass hay than in haylage.