Abstract
目的探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对JAK2V617F突变阳性的骨髓增殖性肿瘤(MPN)细胞内基质金属蛋白酶(MMP)调控的影响。方法①收集2012年1月到2015年12月保定市第一医院收治的40例未经治疗的JAK2V617F阳性MPN患者,以15名健康志愿者为对照组。免疫组化法检测两组骨髓活检组织中磷酸化JAK2(p-JAK2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的表达水平。选取JAK2V617F阳性MPN患者骨髓细胞,体外应用Ruxolitinib干预,测定干预前后细胞迁移力和MMP-2、MMP-9表达。②不同浓度Ruxolitinib(0、50、100、250、500、1 000 nmol/L)作用于人红白血病细胞株HEL细胞不同时间后CCK-8检测细胞活力,Tanswell小室检测细胞迁移,荧光定量PCR检测JAK2、MMP-2、MMP-9 mRNA水平变化,Western blot检测p-JAK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果①MPN组p-JAK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达均高于对照组[(78.56±24.55)%对(41.59±17.29)%、(48.25±18.74)%对(22.79±13.89)%、(53.29±19.28)%对(15.56±14.96)%,P值均<0.05]。Spearman相关分析显示MMP-2、MMP-9蛋白水平与JAK2V617F突变量呈正相关(r=0.526, P=0.001;r=0.543, P=0.001)。②Ruxolitinib能够呈时间和剂量依赖性抑制HEL细胞增殖。③迁移实验结果显示5 nmol/L Ruxolitinib作用MPN原代细胞及HEL细胞24 h后迁移至下室细胞数均少于无Ruxolitinib组(154.7±27.5对320.3±67.3,t=13.47,P=0.001;70.7±10.5对135.3±16.7,t=13.89,P=0.001)。④JAK2、MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达随Ruxolitinib剂量增加而降低。结论Ruxolitinib通过调控JAK2信号通路抑制MMP-2、MMP-9表达而抑制MPN细胞迁移能力。
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