Regulation of Ruxolitinib on matrix metalloproteinase in JAK2V617F positive myeloroliferative neoplasms cells

Abstract

目的探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对JAK2V617F突变阳性的骨髓增殖性肿瘤（MPN）细胞内基质金属蛋白酶（MMP）调控的影响。方法①收集2012年1月到2015年12月保定市第一医院收治的40例未经治疗的JAK2V617F阳性MPN患者，以15名健康志愿者为对照组。免疫组化法检测两组骨髓活检组织中磷酸化JAK2（p-JAK2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9的表达水平。选取JAK2V617F阳性MPN患者骨髓细胞，体外应用Ruxolitinib干预，测定干预前后细胞迁移力和MMP-2、MMP-9表达。②不同浓度Ruxolitinib（0、50、100、250、500、1 000 nmol/L）作用于人红白血病细胞株HEL细胞不同时间后CCK-8检测细胞活力，Tanswell小室检测细胞迁移，荧光定量PCR检测JAK2、MMP-2、MMP-9 mRNA水平变化，Western blot检测p-JAK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果①MPN组p-JAK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达均高于对照组[（78.56±24.55）%对（41.59±17.29）%、（48.25±18.74）%对（22.79±13.89）%、（53.29±19.28）%对（15.56±14.96）%，P值均<0.05]。Spearman相关分析显示MMP-2、MMP-9蛋白水平与JAK2V617F突变量呈正相关（r=0.526, P=0.001；r=0.543, P=0.001）。②Ruxolitinib能够呈时间和剂量依赖性抑制HEL细胞增殖。③迁移实验结果显示5 nmol/L Ruxolitinib作用MPN原代细胞及HEL细胞24 h后迁移至下室细胞数均少于无Ruxolitinib组（154.7±27.5对320.3±67.3，t=13.47，P=0.001；70.7±10.5对135.3±16.7，t=13.89，P=0.001）。④JAK2、MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达随Ruxolitinib剂量增加而降低。结论Ruxolitinib通过调控JAK2信号通路抑制MMP-2、MMP-9表达而抑制MPN细胞迁移能力。