Rapid detection of mutations of drug-resistant genes in Mycobacterium tuberculosis by PCR-oligonucleotide probes

Abstract

目的 应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法.方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs 和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物.结果 18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型.60株结核菌耐药分离株中,59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为93.2%,最常见的突变位点为531位和526位密码子,33株为耐SM株,rpsL基因突变率为75.8%,均为43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为9.1%,均为513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为84.8%;43株为耐EMB株,embB基因突变率为58.1%,均为306位密码子突变.结论应用PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性。