Rapamycin affect the apoptosis of splenic CD4+CD25+ regulatory T cells of mouse severe aplastic anemia model

Abstract

目的探讨雷帕霉素（Rapamycin, RAPA）对重型再生障碍性贫血（SAA）模型小鼠CD4+CD25+ Treg细胞凋亡情况的影响及可能的机制。方法以近交系雌性BALB/c小鼠作为对照（对照组），应用IFN-γ腹腔注射联合白消安灌胃的方法建立SAA小鼠模型（SAA组），并使用RAPA腹腔注射5 d治疗SAA小鼠（RAPA组）。骨髓活检病理学检查观察各组小鼠的骨髓造血组织变化；免疫磁珠分选出各组小鼠脾脏Treg细胞，用流式细胞术检测其凋亡率；Western blot法检测各组小鼠脾脏Treg细胞的Akt、磷酸化（p）-Akt、Stat3、p-Stat3的表达水平；收集各组小鼠外周血和脾脏中单个核细胞，用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞的比例变化。结果与对照组相比，SAA组造血细胞明显减少，且造血细胞被大量的脂肪组织所代替，RAPA组造血细胞亦明显减少，可见大量脂肪细胞；对照组、SAA组、RAPA组小鼠胫骨骨髓造血组织面积分别为（94.25±4.20）%、（7.00±2.00）%、（9.75±1.83）%，差异有统计学意义（Welch F=1 441.822，P<0.001）；RAPA组略高于SAA组[Δx=2.15%（95%CI 0.15%~5.35%），P=0.037]。对照组、SAA组、RAPA组脾脏Treg细胞凋亡率分别为（19.84±1.39）%、（29.85±2.72）%、（22.39±3.71）%，差异有统计学意义（F=18.338，P<0.001）；RAPA组Treg细胞凋亡率明显低于SAA组。RAPA组脾脏Treg细胞中Akt、Stat3的表达水平高于SAA组，而p-Akt和p-Stat3表达水平低于SAA组（P值均<0.05）。SAA组、RAPA组的脾脏CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例均低于对照组，且RAPA组明显高于SAA组（P值均<0.017）。结论IFN-γ联合白消安诱导的SAA模型小鼠脾脏Treg细胞存在过度凋亡现象，而RAPA可能通过抑制Treg细胞内Akt及Stat3的磷酸化上调Foxp3的表达，从而抑制Treg细胞的凋亡。