Abstract
Glycosaminoglycans (GAGs) comprise the extracellular matrix of animal tissues, and residues from processing fish commercially harvested may offer new anticoagulant agents to substitute the heparin (HEP) in medical sciences. The aim of this study was to purify, characterize physico-chemically and evaluate the anticoagulant activity of GAGs isolated from the skin of Nile tilapia, Oreochromis niloticus. The GAGs were extracted with papain in 100 mM sodium acetate buffer (pH 5.0) containing cystein and EDTA (5 mM), followed by ion-exchange chromatography on a DEAE-cellulose column using a NaCl gradient. The obtained fractions were lyophilizated and submitted to 0.5% agarose gel electrophoresis. The anticoagulant activity was assessed by the activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma and HEP standard (193 IU mg-1). The chromatographic profile separated into two different GAGs fractions (F I and F II) eluted at 0.50 and 0.75 M of NaCl, respectively, revealing fractions pattern distinct in the charge densities, but both showing GAGs with mobilities similar to standard dermatan sulfate (DS), suggesting the preliminary identification of this GAG. The GAGs modified the APTT, whose activities were, respectively, 4.72 (F I) and 23.80 (F II) IU mg-1, and expressed themselves dose-dependent. Therefore, the anticoagulant DS from O. niloticus suggests an interesting source for posterior studies of antithrombotic activity.
Highlights
V. 33, n. 3, p. 233-241, 2011 vermelhas (FARIAS et al, 2000; FONSECA et al, 2008; RODRIGUES et al, 2009a), de fucanas ou fucoidanas nas algas marinhas pardas ou marrons (SILVA et al, 2005; YOON et al, 2007); e nas algas marinhas verdes, os mais encontrados são as arabino-galactanas e as raminoses (ZHANG et al, 2008; MAO et al, 2009)
polissacarídeos sulfatados (PSs) também estão presentes em gramíneas marinhas (AQUINO et al, 2005), enquanto nos animais são denominados de GAGs (MEDEIROS et al, 2000; RODRIGUES et al, 2009b), destacando-se o dermatan sulfate (DS), condroitim sulfato (CS), heparam sulfato (HS) e HEP, formando, em sua maioria, agregados poliméricos complexos denominados de proteoglicanos (NELSON; COX, 2005; WU et al, 2010)
Acredita-se que os GAGs são encontrados em todos os filos do reino animal que apresentam organização tissular, sugerindo que eles se conservaram ao longo do processo evolutivo (MEDEIROS et al, 2000)
Summary
A pele da tilápia do Nilo (O. niloticus) foi adquirida a partir de exemplares provenientes de uma fazenda de cultivo comercial desta espécie, localizada no município de Horizonte, Estado do Bioquímica de carboidratos de peixes dulcícolas. No Laboratório, a pele, previamente removida do músculo dos peixes ainda na fazenda por meio do uso de bisturi, foi lavada com água destilada, desidratada ao sol, cortada em pequenos pedaços e armazenada em frasco fechado para posterior extração dos GAGs. A extração dos GAGs foi realizada segundo metodologia de Farias et al (2000), com algumas modificações (RODRIGUES et al, 2009b). O material foi filtrado, centrifugado (5.000 × g; 4oC; 30 min.) e, ao sobrenadante, adicionados 14 mL de uma solução de cloreto cetilpiridinio (CCP) a 10% para precipitação dos GAGs (25°C; 98h). O precipitado obtido foi lavado com 80 mL de CCP 0,05%, dissolvido em 80 mL de NaCl 2 M: etanol absoluto (100:15; v:v) e submetido a uma nova precipitação (4°C; 98h), pela da adição de 80 mL de etanol comercial. Foram utilizados padrões de GAGs conhecidos: CS-4-sulfato de cartilagem de baleia (Sigma), DS de pele de porco e HS de pulmão de bovino (Sigma)
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