Abstract

In this study, we have revisited the existing and suggested new approaches to the use of patch-clamp methodology for measuring the activity of single ion channels and membrane potential of human platelets in the cell-attached configuration. We recorded single-channel events of platelets in the cell-attached configuration after activation with potent agonists: thrombin and ionomycin. The feasibility of platelet membrane potential measurement in cell-attached mode was investigated both experimentally and with the help of simple electrical circuits, revealing that the single-channel events can alter the recorded potential by invoking oscillations. Here, the simple approach to obtain inside-out configuration was described and calcium-dependent single-channel ion currents were recorded. Taken together, this study introduces new approaches for further investigations of the role of ion channels and membrane potential in platelet physiological and pathophysiological response.

Highlights

  • В данной работе рассмотрены существующие и предложены новые подходы к использованию методики пэтч-клэмп для измерения активности одиночных ионных каналов и мембранного потенциала тромбоцитов человека в конфигурации «cell-attached»

  • Клетки ресуспензировали внеклеточным буферным раствором с превалирующим содержанием NaCl

  • Полировка пипеток производилась нагреванием на том же пуллере в соответствие с рекомендациями изготовителя

Read more

Summary

Материалы и Методы

HEPES, АДФ, глюкоза, иономицин и апираза были приобретены в SigmaAldrich (St. Louis, USA). PGI2 был получен в Santa Cruz (Dallas, USA). Внеклеточный буферный раствор с превалирующим содержанием NaCl (внеклеточный буферный раствор) содержал 150. ММ NaCl, 10 мМ KCl, 10 мМ HEPES, 10 мМ глюкозы, pH 7.35 Пипеточный раствор с превалирующим содержанием KCl (пипеточный буферный раствор) содержал 150 мМ KCl, 10 мМ NaCl, 10 мМ HEPES,. 2 мМ CaCl2, 2 мМ MgCl2, pH 7.2 (титрование проводилось с помощью KOH). В экспериментах с заменой ионного состава, в пипеточном растворе

Выделение клеток
Электрофизиологические измерения
Активачия клеток
Результаты и Обсуждение
Получение гигаомного контакта
Измерение ионных токов от одиночных каналов при активации тромбоцитов
Вклад авторов
Конфликт интересов
Список литературы
Full Text
Published version (Free)

Talk to us

Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have

Schedule a call