Abstract
The interaction between nitric oxide (NO) and superoxides is critical in the development of pancreatitis. Previously, we reported on the up-regulation of oxidative stress and NO-synthase (NOS) in the human chronic pancreatitis and in an animal model of pancreatitis induced by pancreatic duct ligation (PDL) in rats. We have shown that oxidative stress runs ahead of NOS up-regulation, which implies that the NO enhancement in the course of pancreatitis is likely to be an adaptive mechanism aimed at maintaining the homeostatic cellular level of the bioactive NO. Here, we report on the expression of NOS and oxidative stress markers (nitrotyrosine and 8-hydroxyguanosine) in the course of cerulein-induced acute pancreatitis in rats. We found that the pattern of superoxides/NO interaction in this model of acute pancreatitis is similar to that in the PDL-induced rat pancreatitis and in the human chronic pancreatitis. It means that cerulein-induced acute pancreatitis like the PDL-induced pancreatitis is a proper model for further studies of pancreatitis development in humans.
Highlights
The interaction between nitric oxide (NO) and superoxides is critical in the development of pancreatitis
We reported on the up-regulation of oxidative stress and NO-synthase (NOS) in the human chronic pancreatitis and in an animal model of pancreatitis induced by pancreatic duct ligation (PDL) in rats
We have shown that oxidative stress runs ahead of NOS up-regulation, which implies that the NO enhancement in the course of pancreatitis is likely to be an adaptive mechanism aimed at maintaining the homeostatic cellular level of the bioactive NO
Summary
Исследование соответствует положениям Руководства по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованному Национальным институтом здравоохранения США (публикация Национального Института Здоровья США No 85-23, пересмотренная в 1996 году) и выполнено в соответствии с инструкцией комитета по содержанию и использованию животных Университета Мюнстера. Демаскирование антигенов проводили с помощью нагревания срезов в цитратном буфере (pH 6.0) при температуре 95°C в течение 30 мин. После извлечения антигена срезы инкубировали с первичными антителами в течение ночи при температуре 4°С. Для блокирования эндогенной пероксидазы после иммунной реакции с первичными антителами и промывки в фосфатном буфере срезы обрабатывали в течение 10 мин в метаноле с 0.6% H2O2. Для светлопольной микроскопии первичные антитела визуализировали с помощью системы амплификации AmpliStainTM HRP (SDT GmbH, Baesweiler, Германия) [7] и коньюгированного с биотином тирамина в сочетании с комплексом HRP–авидин–биотин (Vectastain "Elite" ABC-kit, Vector Laboratories, США). В завершение протокола срезы окрашивали в течение 15 с DAPI (5 мкг/мл PBS; Sigma) и заключали в среду VectaShield (Vector Laboratories, США). Первичные антитела разводили в блокирующем растворе (NOS1 1: 500, NOS3 1: 250 (Transduction Laboratories) и инкубировали на блотах в течение ночи при 4oC. Сравнение содержания белка в образцах образцов было доказано путем определения экспрессии GAPDH
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
