Abstract
Put forward is an efficient method for manufacturing cholera toxin B-subunit. Its advantages are relative simplicity and economy feasibility, as well as maximum output of the purified B-subunit, absolutely free from toxic A-subunit contaminant. All this is due to the deployment of cholera vibrio recombinant strain producing only cholera toxin B-subunit instead of cholera toxin as it is, which results in lack of residual preparation toxicity. Applied has been gel-penetration column chromatography, providing for stable native state and maximum antigen output. The method under discussion is verified experimentally. Sample purity has been analyzed after each phase of chromatographic investigation on TSK gel HW-60, using disc electrophoresis. It is established that three steps of purification are ample for the obtainment of cholera toxin B-subunit preparation free from admixtures. Immunological activity of the purified B-subunit is validated by monoclonal antibody obtainment. Designed preparation of cholera toxin B-subunit and monoclonal antibodies to it can serve as a basis for the development of various immune-diagnostic test-systems alternatives.
Highlights
New Advantageous Method for the Production of Purified Cholera Toxin B-Subunit and Monoclonal Antibodies to It
Its advantages are relative simplicity and economy feasibility, as well as maximum output of the purified B-subunit, absolutely free from toxic A-subunit contaminant. All this is due to the deployment of cholera vibrio recombinant strain producing only cholera toxin B-subunit instead of cholera toxin as it is, which results in lack of residual preparation toxicity
Sample purity has been analyzed after each phase of chromatographic investigation on TSK gel HW-60, using disc electrophoresis
Summary
В работе использован штамм не О1 серогруппы V. cholerae КМ93 (депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб»), содержащий гибридную плазмиду pIEM3 с клонированными генами vctB, детерминирующими синтез В-субъединицы холерного токсина [4]. Белковые фракции из фильтрата осаждали в присутствии 0,25 % гексаметафосфата натрия при рН 4,0, перемешивая в течение 2 ч при комнатной температуре. Препарат диализовали против 50 объемов 0,007 М фосфатного буфера (рН 7,0) в течение 24 ч, нерастворимые примеси удаляли центрифугированием. Собранные фракции спектрофотометрировали при 280 нм и анализировали в реакции иммунодиффузии (РИД) [15] с антисывороткой к В-субъединице холерного токсина. Полученный препарат диализовали в течение 48 ч против 50 объемов 0,9 % хлорида натрия, разливали по 1 мл в ампулы и лиофильно высушивали. Специфическую активность оценивали по титру реакции иммунодиффузии в геле с антитоксической сывороткой методом О.Ouchterlony [15] в его количественной модификации. Чистоту препарата В-субъединицы анализировали в сравнении с коммерческой В-субъединицей холерного токсина («Serva») в диск-электрофорезе в полиакриламидном геле по методу U.K.Laemmli [11]. Моноклональные антитела к полученной В-субъ единице получали с помощью гибридомной технологии [10]
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a callDisclaimer: All third-party content on this website/platform is and will remain the property of their respective owners and is provided on "as is" basis without any warranties, express or implied. Use of third-party content does not indicate any affiliation, sponsorship with or endorsement by them. Any references to third-party content is to identify the corresponding services and shall be considered fair use under The CopyrightLaw.
