Mononuclear cells of umbilical cord blood differentiation to granulocyte cell in vitro

Abstract

目的探索脐血来源单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的方法。方法采用羟乙基淀粉沉降红细胞，淋巴细胞分离液分离单个核细胞。选择不同的培养基、添加剂以及培养模式诱导粒系细胞分化，显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表型，免疫荧光测定粒系细胞CD18表达，并检测细胞吞噬功能。结果采用X-VIVO™ 15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞，细胞存活率、细胞数、粒系细胞分化效率均优于添加胎牛血清组。与SCGM培养基诱导粒系细胞相比，X-VIVO™ 15培养基效果更佳，且成本低。采用造血干细胞扩增和在基础培养基X-VIVO™ 15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞的两阶段扩增、诱导模式，21 d细胞扩增倍数近132倍；流式细胞术检测表明，粒系细胞分化效率滞后于直接诱导模式，粒系标志CD15表达分别为（69.60±1.06）%和（97.73±0.39）%；瑞氏-吉姆萨染色可见成熟的分叶核粒细胞；免疫荧光方法检测显示溶酶体蛋白CD18的表达；成熟的粒细胞具有较强吞噬墨汁的功能，吞噬效率为（51.43±0.05）%。且在细胞趋化因子IL-8作用下，粒细胞具有趋化作用。结论优化了诱导粒系细胞培养体系和培养模式，获得了具有一定功能的粒系细胞。