The induction and cryopreservation of erythroid progenitor cells derived from umbilical cord blood mononuclear cells

Abstract

目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、重组人红细胞生成素的无血清培养基进行体外诱导脐血单个核细胞向红系祖细胞分化，并将诱导的红系祖细胞用不同的冻存液进行冷冻保存，观察红系祖细胞诱导、分化能力和红系祖细胞冷冻保存效果。结果随着诱导时间延长，细胞总数明显增多，培养14 d红系祖细胞扩增约110倍，存活率为（88.92±0.95）%，红系祖细胞特异性标志CD71+细胞占（86.77±9.11）%，CD71 +/CD235a+细胞占（64.47±16.67）%。诱导10 d多为中幼红细胞，可见血红蛋白表达的阳性细胞；诱导14 d开始出现晚幼红细胞，细胞沉淀呈红色。诱导7 d红系集落数为326.00±97.96，高于诱导前（61.60±20.03）。10％二甲基亚砜（DMSO）+2％人血清白蛋白保存细胞复苏后红系祖细胞存活率、回收率分别为（90.32±1.80）%、（93.66±1.87）%，将50％自体脐血浆与10% DMSO、2％人血清白蛋白联用可获得更好的保护效果。结论该无血清培养基可高效诱导、扩增红系祖细胞，10% DMSO+2％人血清白蛋白+50％自体脐血血浆可很好保存红系祖细胞。