Abstract
Effects of in vitro fertilization (IVF) temperature and cumulus oophorus cells removal after IVF or 12 h of embryo culture (IVC) on polyspermy and embryo development rates were evaluated in swine. Oocytes and spermatozoa were incubated at 37 or 38.5oC during IVF procedure. Cumulus oophorus cells were removed from 50% of zygotes of each group 8 hours after IVF and all zygotes were cultured with NCSU23 media. Polyspermy rates were assessed after 12 hours of IVC, when cumulus oophorus cells were removed from the rest of zygotes. In a second experiment, embryos remained in culture for the evaluation of embryo development. No effects of IVF temperature or cumulus oophorus cells removal were observed after 12 hours of IVC on polyspermy and embryo development (p KEYWORDS: Cumulus oophorus cells, in vitro fertilization, polyspermy, swine, temperature.
Highlights
A produção de embriões suínos in vitro (PIV) é pré-requisito para o desenvolvimento de biotecnologias que resultam na produção de animais transgênicos, quimeras e clones, pois possibilita a obtenção de embriões em diferentes estágios, os quais são necessários para a aplicação dessas técnicas
Procedeu-se à retirada da zona pelúcida pela exposição, por seis minutos, à tripsina 2% em PBS, sem cálcio e magnésio, sendo os zigotos colocados entre lâmina e lamínula em gotas de Mowiol com 10μl/mL de Hoechst 33342, para avaliação dos índices de poliespermia, em microscópio invertido de epiflorescência e objetiva de 40X, conforme OCAMPO et al (1994)
Effect of the removal of cumulus oophorusoophorus cells on the nuclear maturation, fertilization and development of porcine oocytes
Summary
Todos os reagentes utilizados neste estudo foram fabricados pela Sigma-Aldrich Chemicals Após as oito horas da inseminação, lavaram-se os presumíveis zigotos em meio de cultivo NCSU23 suplementado com 0,4% de BSA e em metade dos zigotos de cada um dos grupos (37oC ou de 38,5oC) procedeu-se à retirada das células do cumulus oophorus com auxílio de pipeta automática. Procedeu-se à retirada da zona pelúcida pela exposição, por seis minutos, à tripsina 2% em PBS, sem cálcio e magnésio, sendo os zigotos colocados entre lâmina e lamínula em gotas de Mowiol com 10μl/mL de Hoechst 33342, para avaliação dos índices de poliespermia, em microscópio invertido de epiflorescência e objetiva de 40X, conforme OCAMPO et al (1994). Após 72 horas de cultivo, transferiram-se os embriões para gotas de 100μL de meio de cultivo suplementado com 20% de SFB (soro fetal bovino), os quais foram mantidos em estufa a 38,5oC, 5% de CO2 em ar e umidade saturada. Para a comparação das médias, empregou-se o método de Tukey, com o nível de significância de 5%
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