Efficiency of bacteriophage lytic enzymes in the course of bacterial ghosts generation

Abstract

<h3>ВВЕДЕНИЕ</h3> Бактериальные тени (БТ) представляют собой клеточные оболочки грамотрицательных бактерий без цитоплазматического содержимого, полученные путем лизиса в результате перфорации клеточной стенки, опосредованной белком E бактериофага φX174. Введение в конструкцию литической плазмиды в дополнение к гену белка E бактериофага φX174 генов лизиса других бактериофагов, нацеленных на альтернативные молекулярные мишени, может привести к повышению эффективности лизиса, а в ряде случаев и к повышению иммуногенности препаратов. <h3>МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ</h3> Получены штаммы <i>Escherichia coli</i>, несущие плазмиды с различными комбинациями генов, кодирующих белок E фага φX174 с кассетами литических генов систем «холин-эндолизин» фагов λ или Л-413C, обеспечивающих различную степень деструкции клеточной стенки, для последующего отбора наиболее перспективных литических конструкций. Образование бактериальных теней <i>E. coli</i> и высвобождение содержимого клеток подтверждали с помощью просвечивающей электронной микроскопии. <h3>РЕЗУЛЬТАТЫ</h3> При повышении температуры выращивания с 28 °C до 42 °C наблюдали лизис культур <i>E. coli</i> DH5α/pEYR’-E, DH5α/pEYR’-Y-K, DH5α/pEYR’-E-Y-K, DH5α/pEYR’-E-Sam7-R-Rz. Лизис практически не детектировали при росте культуры DH5α/pEYR’-S-R-Rz, как и у контрольного штамма DH5α/pEYR’. Результаты анализа ультратонких срезов препаратов БТ методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) были сопоставимы с данными по оптической плотности и результатами высевов индуцированных культур сконструированных штаммов, а также позволили оценить тонкое строение бактериальных клеток, несущих различные комбинации литических генов бактериофагов. <h3>ЗАКЛЮЧЕНИЕ</h3> БТ грамотрицательных бактерий перспективны для создания высокоэффективных инактивированных вакцин-кандидатов, которые могли бы заменить имеющиеся в настоящее время бактериальные термоинактивированные и формолвакцины.