Effects of Cullin1 on the Biological Characteristics of Lung Adenocarcinoma A549 and H1395 Cells

Abstract

背景与目的Cullin1是Cullin家族中有代表性的一员，对细胞周期、转录和信号转导相关蛋白泛素化起重要作用，Cullin1与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切的联系。本研究旨在探讨Cullin1对肺腺癌A549和H1395细胞生物功能的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）检测肺腺癌细胞（A549、H358、H1395、H1650）及人正常肺上皮细胞BEAS-2B中Cullin1 mRNA表达，采用siRNA技术干扰Cullin1 mRNA相对高表达的肺腺癌细胞；采用四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium assay, MTT）、流式细胞术及Transwell实验检测细胞增殖、细胞周期分布、细胞早期凋亡及侵袭和迁移能力；采用Western blot检测基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9, MMP-9）、组织基质金属酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白E2（Cyclin E2）、p21和p27蛋白的表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比，肺腺癌细胞中Cullin1 mRNA均呈高表达，尤其在肺腺癌A549和H1395细胞中相对表达量较高（P < 0.05）；干扰Cullin1后肺腺癌细胞的增殖能力受到了抑制，G1期细胞增多，S期细胞数目减少，肺腺癌细胞早期凋亡率明显升高（P < 0.05）；肺腺癌细胞的侵袭及迁移能力下降（P < 0.05）；干扰Cullin1后MMP-9、MMP-2、Cyclin D1及Cyclin E2蛋白表达量减少（P < 0.05），而TIMP-1、p21和p27蛋白表达量增多（P < 0.05）。结论干扰Cullin1后可抑制肺腺癌A549和H1395细胞的增殖、侵袭和迁移，Cullin1在肺腺癌中发挥促癌作用。