Abstract
Oligosaccharides are a class of polymeric carbohydrates, which are constituents of a glycoside portion of glycoprotein and glycolipid molecules. The lysosomal hydrolase dysfunction due to lysosomal storage disorders results in partial or complete failure of degradation of some glycoproteins and glycolipids, causing the accumulation of specific undegraded substrates in the lysosomes of cells, the formation of the great number of oligosaccharide chains and their increased excretion with urine. Our work was aimed at detailed study of the specificities of interpreting the results of thin-layer chromatography (TLC) of urine oligosaccharides in healthy persons of different age groups with the purpose of further application of these data while differentiating the norm and pathology in the course of primary selective screening of lysosomal storage disorders. The results obtained demonstrated that TLC plates for the majority of healthy persons had insignificant excretion of a number of oligosaccharides (from monosaccharides to hexasaccharides) with R(lac) > 0.15, which can be characterized as physiological oligosacchariduria, conditioned by the metabolism specificities in lysosomes. Therefore while interpreting the urine samples of patients with the suspected lysosomal storage disorder it is diagnostically reasonable to examine the TLC plates for the presence of both oligosaccharide groups, absent in the samples of healthy persons, and all the fractions with R(lac) < 0.15.
Highlights
Деградація глікопротеїнів та гліколіпідів відбувається переважно в лізосомах за участю лізосомальних гідролаз, таких як нейрамінідаза, α-фукозидаза, α- і β-манозидаза, β-галактозидаза, α- і β-глюкозидаза, N-ацетилгексозамінідаза тощо [2, 3]
Патологічний процес накопичення нерозщеплених глікопротеїнів або гліколіпідів у лізосомах, обумовлений дефіцитом відповідних лізосомальних гідролаз у хворих із лізосомні хвороби накопичення (ЛХН) призводить до утворення великої кількості олігосахаридних молекул та підвищення їх екскреції із сечею
Спираючись на результати тонкошарової хроматографії (ТШХ) олігосахаридів, одержані в зразках здорових осіб, нами було проаналізовано спектри олігосахаридів сечі пацієнтів із підозрою на наявність ЛХН
Summary
Матеріалом для дослідження була добова сеча здорових дітей віком до 1 року (20 осіб), від 1 до 5 років (20 осіб) та дітей віком старше за 5 років (20 осіб), а також пацієнтів (1867 осіб) із різних регіонів України, які звернулися за консультацією в Медико-генетичний центр (МГЦ) і Центр метаболічних захворювань (ЦМЗ) НДСЛ «ОХМАТДИТ» МОЗ України з підозрою на наявність спадкових хвороб обміну речовин. Зразки нативної сечі центрифугували при 2000 g протягом 10 хв, після чого супернатант використовували для нанесення на ТШХ-пластину та для визначення рівня креатиніну. Зразки на ТШХ-пластини наносили за допомогою капіляра в кількості, еквівалентній 20 мкг/л креатиніну (приблизно 10–20 мкл), тонкою смужкою довжиною 10 мм, підігріваючи в цей час пластину на нагрівальному пристрої УСП-1М до температури 40 °C [2]. Для проведення ТШХ використовували скляну камеру висотою 20 см. Для візуалізації фракцій олігосахаридів використовували орциновий реагент (50 мг орцину, 9,5 мл етилового спирту, 0,5 мл 98%-ої сірчаної кислот), який наносили методом поливання ТШХ-пластин із подальшим прогріванням пластини при 100 oС до появи забарвлення [11]. Швидкість руху речовини під час проведення ТШХ залежить від виду розчинника, сорбенту та техніки експерименту. Аналізуючи результати, не враховували зразки, в яких значення Rf лактози становило менше 0,28, тому що за таких умов неможливо візуалізувати та вірно ідентифікувати всі фракції олігосахаридів
Sign-in/Register to view highlights & summary 
Published Version (
Free)
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call