Determination of trace genotoxic impurities in nifedipine by ultra high performance liquid chromatography-electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry

Abstract

建立了测定硝苯地平中基因毒性杂质2、6和12的超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Orbitrap HRMS)。样品以甲醇为溶剂,提取后直接进样分析。采用ACE EXCELTM 3 C18-AR色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3 μm)分离,流动相为甲醇-0.1%甲酸水(65:35, v/v),等度洗脱。质谱部分采用电喷雾电离(ESI)源。采用正离子平行反应监测(PRM)扫描模式,质谱分辨率为35000 FWHM,杂质2、6、12的[M+H]+母离子准确质量数分别为m/z 347.1230、361.1026、347.1230,提取[M+H]+碎片离子准确质量数分别为m/z 315.0968、298.1069、315.0968,归一化碰撞能量(NCE)分别为10%、42%、10%,外标法定量。对方法进行了详细的方法学验证,结果表明,该法专属性良好,溶剂对杂质测定无干扰;杂质2、6、12质量浓度与其峰面积在0.2~100 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数(r)均≥0.9998;杂质2、6、12在低、中、高3个水平下的回收率为96.9%~105.0%, RSD为1.21%~5.12%,检出限均为0.05 ng/mL,定量限均为0.2 ng/mL。应用该方法对3批硝苯地平样品中的杂质2、6、12进行测定,3批样品均未检出杂质6,但均检出杂质2和杂质12,其检出量未超过限度。该方法灵敏、快速、准确,操作简便,可为药企对硝苯地平的质量控制提供参考,并为药监部门的监管提供有力的技术支持。