Abstract
Foram utilizadas 112 amostras de muco vulvovaginal, coletados de vacas com distúrbios reprodutivos, para pesquisa de Mycoplasma e Ureaplasma. Para isolamentos, foram usados meios específicos para micoplasmas (SP-4) e para ureaplasmas. PCR genérica, PCR específica para Mycoplasma bovis e nested-PCR em tubo único para Ureaplasma diversum foram realizados com os DNAs extraídos das amostras. Mycoplasma spp. e U. diversum foram detectados em 12,5 e 25,0%, respectivamente. A PCR genérica resultou em reações positivas em 63,4% das amostras transportadas em SP-4 e em 69,6% das transportadas em meio de ureaplasma. M. bovis foi detectado, na PCR específica, em 9,8% das amostras e U. diversum, na nested-PCR, em 37,5%. Houve maior sensibilidade na metodologia da PCR quando comparada à técnica de cultivo para Mycoplasma e Ureaplasma.
Highlights
In the study, 112 samples of vulvovaginal mucus of cows bearing reproductive disturbance were investigated for Mycoplasma and Ureaplasma
Essas técnicas são indicadas para a detecção dos micoplasmas devido às dificuldades encontradas no cultivo e isolamento desses microrganismos
Nonparametric statistic for the behavioral sciences, New York: McGraw-Hill, 1956. 312p
Summary
As cepas M. alkalences – PG51, M. arginini – PG40, M. bovis – Donetta, M. bovigenitalium e Acholeplasma ladlawii foram cultivadas em meios sólidos e líquidos SP-4 (Tully, 1995) e U. diversum – ATCC 49783 cultivada em meios sólido e líquido para ureaplasma (Ruhnke e Rosendal, 1994). O DNA obtido pelos diferentes métodos de extração (5% do volume final em diluições de 10-1a 10-5) foram submetidos a PCR para detecção de M. bovis (González et al, 1995). A metodologia descrita por Fan et al (1995) foi realizada para extração de DNA de 1ml das amostras clínicas. A PCR para detecção dos gêneros pertencentes à classe Mollicutes (PCR genérica) foi realizada como descrita por Van Kuppeveld et al (1992). A nested-PCR em tubo único para detecção de U. diversum foi otimizada seguindo parâmetros citados por Cardoso et al (2000), com alteração na seqüência de oligonucleotídeos iniciadores em um dos primers externos. O seqüenciamento dos produtos amplificados pela PCR específica para M. bovis e nested-PCR para U. diversum foi realizado no aparelho ABI. Seqüência dos primers utilizados nas PCR genérica, PCR M. bovis e nested-PCR
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