Construction of A eukaryotic expression vector carrying the iNOS gene and its effect on A549 lung cancer cells

Abstract

背景与目的iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关。本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞，检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段，构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞，通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达；采用MTT法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响。结果真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功，iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高。pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移。结论本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒，高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡。本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略。