Construction and influence of human nuclear factor-κB p65 shRNA lentiviral vector on malignant biological behavior of lung cancer cells

Abstract

背景与目的核因子-κB作为重要转录因子，与多种恶性肿瘤的发生发展有着密切联系，直接或间接抑制NF-κBp65的表达可逆转肿瘤细胞生物学行为。构建人核因子-κBp65基因shRNA重组质粒，感染A549细胞并筛选出稳定细胞株，对其迁移、粘附能力进行鉴定。方法设计并合成人核因子-κBp65的乱序对照序列（scramble）和干扰序列（shRNA）构建重组质粒，在5’端引入一个BamHI位点，3’端引入一个XhoI位点和EcoRI位点；感染A549细胞并由嘌呤霉素做稳转株的筛选；应用Western blot、qRT-PCR技术检测NF-κBp65的干扰效果及IκBα蛋白表达水平的变化；Transwell、MTT法分析其对A549细胞迁移、粘附能力的影响。结果成功构建重组质粒并筛选出A549/NF-κB p65 scramble稳转株和A549/NF-κB p65 shRNA稳转株；A549/NF-κB p65 shRNA稳转细胞株与A549/NF-κB p65 scramble稳转细胞株及A549细胞相比NF-κBp65的mRNA、蛋白表达水平均下调；IκBα蛋白水平明显下调；细胞迁移能力及粘附能力均降低。结论本实验通过RNA干扰技术构建的重组慢病毒可有效抑制NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平；抑制NF-κBp65可明显降低A549细胞的迁移和粘附能力。