Abstract
We constructed pKLAC2-based integrative expression plasmid pKGLA-1 with glaA gene from Aspergillus awamori 466. The PCR amplification of the target gene glaA and restriction analysis proved pKGLA-1 construction. Linearised plasmid was used for the integrative transformation of chemically competent Kluyveromyces lactis GG799 cells. Colonies of cells transformed with pKGLA-1 plasmid were selected by growth on agar plates containing 5 mmol/L acetamide. Expression of the heterologous gene in K. lactis cells was visually assessed using medium containing 2 % starch. K. lactis cells containing integrated pKGLA-1 DNA secreted recombinant protein glucoamylase with a native N-terminus.
Highlights
Образеццитирования: Кулик ЕВ, Русь ОБ, Евтушенков АН
Linearised plasmid was used for the integrative transformation of chemically competent Kluyveromyces lactis GG799 cells
Colonies of cells transformed with pKGLA-1 plasmid were selected by growth on agar plates containing 5 mmol/L acetamide
Summary
В результате проведенного клонирования нуклеотидной последовательности гена glaA в клетках Kluyveromyces lactis GG799 синтезируется рекомбинантный фермент с нативным N-концом. Forcitation: Kulik AV, Rus OB, Evtushenkov AN. Авторы: Елена Вячеславовна Кулик – кандидат биологических наук; заведующий научно-исследовательской лабораторией трансгенных растений кафедры молекулярной биологии биологического факультета. Ольга Борисовна Русь – кандидат химических наук, доцент; доцент кафедры молекулярной биологии биологического факультета. Анатолий Николаевич Евтушенков – доктор биологических наук, профессор; заведующий кафедрой молекулярной биологии биологического факультета. N. EVTUSHENKOV a aBelarusian State University, 4 Niezaliežnasci Avenue, Minsk 220030, Belarus. We constructed pKLAC2-based integrative expression plasmid pKGLA-1 with glaA gene from Aspergillus awa mori 466. Для осуществления процесса интеграции экспрессионной кассеты с клонированным геном в локус LAC4 генома K. lactis в результате гомологичной рекомбинации необходимо линеаризировать рекомбинантный вектор с помощью рестриктазы SacII или BstXI. Селективный отбор дрожжевых трансформантов на минимальной среде с ацетамидом обеспечивает ген amdS, кодирующий ацетамидазу A. nidulans и расположенный в интегрируемой экспрессионной кассете вектора под контролем дрожжевого промотора PADH1
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Free) 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
