Abstract
This article describes successful insertion the cDNA glucoamylase from Aspergillus awamori into the integrative vector for filamentous fungi pH4Hyg using the CPEC (circular polymerase extension cloning) strategy. The prior step was the PCR amplification of the cDNA glaA gene cloned into a vector based on the plasmid pBluescript II SK(-) and the amplification of linear pH4Hyg vector with promotor and terminator of the glaA gene. The PCR products were purified and used for CPEC reaction. The CPEC product was formed after 20 cycles of the reaction. It is proposed to use the final plasmid pH4HygPTgla in engineering of filamentous fungi strains producing stable forms of glucoamylase with biotechnological interest.
Highlights
This article describes successful insertion the cDNA glucoamylase from Aspergillus awamori into the integrative vector for filamentous fungi pH4Hyg using the CPEC strategy
При высокой концентрации глюкозы в реакционной среде глюкоамилазы могут катализировать реакцию транс-гликозилирования с образованием мальтозы, изомальтозы и других продуктов [3]
Information about thе authorsBelarusian State University (4, Nezavisimosti Ave., 220030, Minsk, Republic of Belarus)
Summary
C CG GATC CG GAGA ATCAG CAG GAG C CAT T CCGGATCCGAGCCGATCAGACCAGTAGGT ССС C TCGAGA A A AGAG CGAC C T TG GAT TCGTG GT TGAG СССGA AT TC C TAC CG C CAG GTGTCAGTCAC C открывает перспективы существенного повышения эффективности технологического процесса. В результате реакции амплификации с использованием пары праймеров glaf, glar и в качестве матрицы плазмиды pBGLA-1 получен ампликон кДНК размером около 1800 п. В случае эффективного субклонирования в составе вектора pH4HygglaA в гене глюкоамилазы кодирующая последовательность полноразмерного гена с интронами была заменена на кДНК, при этом участки промотора и терминатора остались от исходного гена. Однако при использовании праймеров к промотору и терминатору гена глюкоамилазы (glaA1f и glaA1r), а также в качестве матрицы конструкции pBGLA-1 ПЦР-продукт не синтезируется, поскольку эта плазмида содержит только кДНК целевого гена. 1 – ДНК-маркер (Gene Ruler DNA Ladder Mix, Thermo Fisher Scientific); 2 – размер плазмиды pH4HygРТgla, синтезированной в результате реакции, составил 9216 п. PH4HygglaA, в котором кодирующая последовательность полноразмерного гена глюкоамилазы A. awamori с интронами заменена на кДНК, при этом участки промотора и терминатора остались от исходного целевого гена. Полученная плазмидная ДНК может найти применение при создании штаммов A. awamоri, синтезирующих и секретирующих глюкоамилазу с определенными промышленно значимыми характеристиками
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Free) 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
