Abstract
Descreve-se a padronização de nova metodologia para detecção de anticorpos antiformas promastigotas fixadas de L. (L.) chagasi, por citometria de fluxo (AAPF-IgG), sua aplicabilidade e desempenho na identificação de casos de leishmaniose visceral canina (LVC). Foram avaliados dois grupos de cães classificados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), como: não reatores (NR, n=10) e reatores (R, n=50) dos quais foram coletadas amostras de sangue (soro) para realização dos testes laboratoriais. Os resultados relacionados ao estabelecimento, aplicabilidade e desempenho da metodologia AAPF-IgG demonstraram que essa metodologia possibilita a identificação de uma região de reatividade diferencial entre cães NR e R, no soro diluído a 1:2048 e o valor de 20% de parasitos fluorescentes positivos (PPFP) como ponto de corte entre resultados positivos e negativos, mostrando que a AAPF-IgG aplica-se na identificação de casos de LVC, possibilitando distinguir 96% de cães R como positivos e 100% de cães NR como negativos. Esses resultados em conjunto sugerem que a utilização da AAPF-IgG pode ser um novo instrumento para ensaios clínicos de diagnóstico sorológico da LVC.
Highlights
A leishmaniose visceral é uma antropozoonose de distribuição mundial, causada por Leishmania (Leishmania) chagasi ou Leishmania (Leishmania) infantum
As informações geradas nesse estudo abrem novas perspectivas para pesquisa sorológica na leishmaniose visceral canina (LVC) e estimulam sua continuidade por meio da avaliação da reatividade cruzada com outros organismos e da avaliação de classes de Ig (IgA e IgE) e subclasses de IgG em diferentes formas clínicas da doença, cães vacinados ou em tratamento
Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. v.35, p. 551-562, 2002
Summary
A pesquisa foi realizada no município de Belo Horizonte com cães recolhidos de áreas endêmicas com alta prevalência de casos humanos de leishmaniose visceral nos últimos anos, de acordo com dados fornecidos pela Secretaria Municipal de Saúde de Belo Horizonte (SMS/BH). No meio contendo apenas LIT, os parasitos foram incubados por um período de 10 dias de cultivo para serem utilizados nos experimentos de reação de imunofluorescência indireta por citometria de fluxo. Para revelação da ligação de IgG na superfície do parasito, procedeu-se à incubação, ao abrigo da luz, das formas promastigotas fixadas, na presença de 50μl de anticorpo policlonal anti-IgG canino (específico para a porção Fc) marcado com isotiocianato de fluoresceína-FITC nas diluições (1:500, 1:1000 e 1:2000 em PBS-SFB) a 37oC por 30 minutos. Os resultados das análises de fluorescência foram expressos sob a forma de percentual de parasitos fluorescentes positivos (PPFP) observados para cada teste individual em relação ao controle do conjugado. O PPFP foi determinado para cada amostra por limiar de negatividade em função da curva de fluorescência obtida para o controle da ligação inespecífica do conjugado (M1, Figura 1B). A analise estatística foi realizada utilizando o software MedCalc, por meio do qual foram determinados: a acurácia, o ponto de corte do método avaliado através da receiver operating characteristic (curva ROC) e os índices de desempenho do método: sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo, índice J de Youden e razões de verossimilhança
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