Caracterización estructural y funcional de una fosfolipasas A2 homóloga K49 del veneno de Bothrops barnetti, por aproximación proteómica.

Abstract

Las Fosfolipasas A2 (PLA2) son enzimas que intervienen en señales de transducción, activando distintos procesos como la contracción de músculo liso, activación de la cascada de inflamación e intervención en procesos digestivos del intestino; procesando lípidos para su posterior absorción. Dentro del grupo de fosfolipasas existe un subgrupo conocido como “PLA2 homólogas”, las cuales no ejercen actividad catalítica debido a la mutación de un aminoácido en el sitio activo; pero aunque estas toxinas carecen de acción lipolitica, producen efectos biológicos similares a sus homólogas catalíticamente activas, entre los cuales se destacan la miotoxicidad e inflamación.En la presente investigación se buscó encontrar una PLA2 homóloga K49 en el veneno de Bothrops barnetti peruana; mediante una columna de interacción hidrofóbica se obtuvieron diversas enzimas, las cuales por análisis de actividad pro-inflamatoria y electroforesis SDS-PAGE fue posible aislar una muestra de aproximadamente 14 kDa con actividad fosfolipásica en relación al resto, la cual se denominó BbTX-II. Mediante espectrometría de masas se determinó la masa molecular promedio de 14242 Da. y se realizó una caracterización de la estructura primaria, obteniendo la secuencia de 3 péptidos; finalmente se realizó un estudio de homología secuencial determinando que la muestra es una PLA2 homóloga K49. Paralelamente se realizó una caracterización biológica de la muestra para determinar el efecto miotóxico; evaluando los mediadores envueltos en la migración leucocitaria y en el efecto inflamatorio (IL-1, IL-6 y TNFα), observando un aumento de los mediadores dentro de las primeras 3 horas; determinando así un efecto local de la muestra