Διερεύνηση των toll-like υποδοχέων στην πειραματική αθηρωμάτωση

Abstract

Η αθηρωμάτωση αποτελεί, στις αναπτυγμένες χώρες, την κύρια αιτία των καρδιαγγειακών παθήσεων. Η κατανόηση, κατά την τελευταία δεκαετία, των μοριακών και κυτταρικών μηχανισμών πρόκλησης της αθηρωματικής βλάβης έχει μεταβληθεί ριζικά λόγω της σημαντικής προόδου της μοριακής βιολογίας και της γενετικής καθώς και της επιτυχούς ανάπτυξης ζωικών προτύπων αθηρωμάτωσης. Η αθηρωμάτωση δεν αποτελεί, πλέον, μια αναπόφευκτη συνέπεια της γήρανσης αλλά μια χρόνια φλεγμονώδη ασθένεια με εξαιρετικά υψηλή νοσηρότητα και θνητότητα. Τα τελευταία χρόνια, η έρευνα στην διευκρίνιση του μηχανισμού της αθηρογένεσης εστιάζεται και στους υποδοχείς Τoll-like receptors (TLR) και στον τρόπο με τον οποίο αυτοί μπορεί να ενεργοποιήσουν, να ενισχύσουν ή να παρατείνουν την φλεγμονώδη αντίδραση στο τοίχωμα των αρτηριών. Παρά το γεγονός ότι πολλές έρευνες αποδεικνύουν την ενεργοποίηση των TLRs στα κυτταρικά συστατικά του καρδιαγγειακού συστήματος φαίνεται ότι μεμονωμένα οικογενειακά μέλη των TLR διαδραματίζουν ένα παθοφυσιολογικό ρόλο στην πρόκληση των καρδιαγγειακών παθήσεων και για τον λόγο αυτό επιδιώκεται να καθοριστούν κλινικά. Η μελέτη σε βασικό αλλά και σε κλινικό επίπεδο για την οικογένεια αυτή των TLRs έχουν υποβοηθήσει στην κατανόηση του μηχανισμού της αγγειακής και της μυοκαρδιακής λειτουργίας. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διευκρινιστεί αν η παρατεταμένη ενεργοποίησή του TLR8 καθώς και των TLR2, TLR3, TLR4 συμβάλει στην ανάπτυξη ή την επιδείνωσή της αθηρωματικής βλάβης. Ο στόχος της ερευνητικής προσπάθειας ήταν: α) να σχεδιαστεί ο TLR8 στο γονιδίωμα του κουνελιού, β) να προσδιοριστεί ο ρόλος των TLR υποδοχέων στην ανάπτυξη της αθηρωματικής νόσου στο υπερλιπιδαιμικό κουνέλι, γ) να μελετηθεί η έκφραση των υποδοχέων TLR στο αρτηριακό τοίχωμα κατά την εξελικτική πορεία της αθηρωμάτωσης και δ) να συσχετιστούν οι TLR με το είδος και την έκταση των αθηρωματικών αλλοιώσεων. Πρόκειται για μία προοπτική, τυχαιοποιημένη και ελεγχόμενη μελέτη παρέμβασης στην οποία χρησιμοποιήθηκαν ως ζωικά πρότυπα 24 αρσενικά κουνέλια Νέας Ζηλανδίας. Την 12η εβδομάδα ηλικίας τους τα κουνέλια τυχαιοποιήθηκαν στις παρακάτω ομάδες: α) στην ομάδα (Ε) ελέγχου (n=6), β) στην ομάδα Α (n=6), γ) στην ομάδα Β (n=6) και δ) στην ομάδα Γ (n=6). Στις ομάδες Α, Β και Γ χορηγήθηκε αθηρογόνος τροφή και ειδικότερα στην ομάδα Α για 4 εβδομάδες, στην ομάδα Β για 8 εβδομάδες και στην ομάδα Γ για 12 εβδομάδες. Στην ομάδα Ε (n=6) χορηγήθηκε φυσιολογική τροφή για διάστημα 12 εβδομάδων. Στο τέλος της χρονικής περιόδου κάθε ομάδας έγινε ευθανασία των ζωικών προτύπων. Τμήμα της θωρακικής και της κοιλιακής αορτής αφαιρέθηκε και εγκλείστηκε σε παραφίνη ενώ ένα άλλο τμήμα φυλασσόταν σε ειδικά φιαλίδια στους -80°C για τον προσδιορισμό των TLR υποδοχέων. Τόσο κατά την έναρξη όσο και κατά την λήξη της μελέτης έγινε αιμοληψία στα ζώα κάθε ομάδας για τον προσδιορισμό των επιπέδων της χοληστερίνης, των τριγλυκεριδίων και της ομοκυστεΐνης. Κατά την ιστολογική ανάλυση προσδιορίστηκαν η διάμετρος του αυλού του αγγείου το εμβαδό των αθηρωματικών πλακών και ο % βαθμός στένωσης του αυλού που προκαλείται από τις αθηρωματικές πλάκες. Με την χρώση Alizarin Red μελετήθηκε η ασβεστοποίηση των αθηρωματικών πλακών, με την χρώση Οil red η συσσώρευση των λιπιδίων στην αθηρωματική πλάκα και τέλος με την χρώση ορσεΐνης το εμβαδό της ίνωσης. .................................................................