홍경천(Rhodiola sachalinensis A. Bor)의 캘러스 배양에서 Salidroside생산

Abstract

본 실험은 기내 배양된 홍경천으로부터 캘러스를 유도하고 가장 잘 자라는 생장조건을 찾기 위해 수행되었다. 실험 결과를 종합해 보면 캘러스의 증식을 위한 배양조건은 최적배지를 조사한 결과,2B<TEX>$_{5}$</TEX>배지에서 생장율이 가장 좋았으며, 탄소원으로는 sucrose를 3%로 첨가했을 때 생장율이 가장 높았다. 질소원으로써는 49.6mM KNO<TEX>$_3$</TEX>와 2.0mM (NH<TEX>$_4$</TEX>)<TEX>$_2$</TEX>SO<TEX>$_4$</TEX>를 첨가했을 때 생장율이 가장 좋았으며, 인산의 농도는 2.16mM에서 높은 생장율을 보였다. 암배양과 광배양을 비교했을 때 암배양의 경우가 생장율이 높았으며,pH6에서 세포의 생장율이 가장 좋은 조건임을 확인되었다. 기내에서 배양된 캘러스와 자연산 뿌리는 TLC로 분석하여 salidroside를 확인하였으며, HPLC로 salidroside를 정량한 결과, 자연상태 홍경천의 뿌리는 건중량 당 0.17%으로 나타났으며 5% sucrose처리구에서 0.41%의 생산성을 보여, 자연산 홍경천의 뿌리에 비하여 캘러스에서 salidroside의 함량이 높은 것으로 나타났다. Callus of Rhodiola sachalinensis A. Bor were induced from leaf explant on l/2MS solid supplemented with combination of auxin (2.4-D, NAA: 0.1∼2mg/L) and cytokinin (BA: 0.1∼0.2mg/L). The effects of various medium, culture conditions and phytohormones on the growth of callus were investigated. MS, WPM, B<TEX>$_{5}$</TEX> medium and diluted or concentrated media (1/2X, 2X, 3X) were used to investigate the growth of callus on each media. Among these, the highest growth was observed when cultured in in 2B<TEX>$_{5}$</TEX> medium containing 0.5mg/L NAA and 1mg/L BA, 3％ sucrose and 49.6 mM KNO<TEX>$_3$</TEX> as nitrogen source, and 2.16mM NaH<TEX>$_2$</TEX>PO<TEX>$_4$</TEX> as phoshate source at <TEX>$25^{\circ}C$</TEX> in the dark. The calli cultured with 5％ sucrose produced high salidroside content (0.41％ on the basis of dry wt) than normal root (0.17％).