Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian substrat lumpur kolam sebagai pupuk untuk pertumbuhan Daphnia sp. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen dengan 4 perlakuan dan 3 kali ulangan. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pada setiap perlakuan tidak memberikan pengaruh nyata. Rata-rata pertambahan Daphnia sp. tertinggi terdapat pada pemberian substrat lumpur dasar kolam pada perlakuan B yaitu 27,09 ind/l di ikuti oleh perlakuan C dan A yaitu 23,90 ind/l dan 23,67 ind/l serta terendah pada perlakuan D yaitu 9,71 ind/l. Sedangkan pada pemberian substrat lumpur kolam pada ketebalan 10 cm memiliki jumlah relatif menurun dari pemberian substrat lumpur dasar kolam yaitu perlakuan A yaitu 17,90 ind/l, perlakuan C yaitu 14,33 ind/l, Perlakuan D yaitu 12,62 ind/l, dan perlakuan B yaitu 11,48 ind/l. Dengan persamaan regresi pada pemberi substrat lumpur dasar kolam yaitu y = -4.507x + 32.36, R2 = 0.564, dan pemberian substrat lumpur pada ketebalan 10 cm yaitu y = -1.299x + 17.33 , R2 = 0.358. This study aims to determine the effect of the pond mud substrate as fertilizer for the growth of Daphnia sp. The method used in this study is an experimental method with 4 treatments and 3 replications. The results obtained indicate that each treatment did not have a real effect. The average increase in Daphnia sp. the highest was found in the substrate mud substrate pool in treatment B that was 27.09 ind / l followed by treatments C and A which were 23.90 ind / l and 23.67 ind / l and the lowest in treatment D was 9.71 ind / l. Whereas the administration of pond mud substrate at a thickness of 10 cm has a relatively decreasing amount of substrate pond substrate administration, namely treatment A is 17.90 ind / l, treatment C is 14.33 ind / l, Treatment D is 12.62 ind / l , and treatment B is 11.48 ind / l. With the regression equation for the substrate sludge pond bottom is y = -4.507x + 32.36, R2 = 0.564, and the giving of mud substrate at a thickness of 10 cm is y = -1.299x + 17.33, R2 = 0.358. Katakunci: Daphnia sp.; substrat; lumpur; pupuk; pertumbuhan. Keywords: Daphnia sp.; substrate; mud; fertilizier; growth