Vírus da artrite encefalite caprina: isolamento e caracterização de parte do gene gag

P.P Lima,A.M.G Gouveia,D Stancek,M.A Rocha,G.D.R Oliveira

doi:10.1590/s0102-09352004000200001

Abstract

Amostras de sangue de 12 animais soropositivos pelo teste de imunodifusão em gel de agarose e que não apresentavam sinais clínicos sugestivos de infecção pelo vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) foram coletadas para isolamento viral. Mácrofagos derivados de monócitos foram co-cultivados com células de membrana sinovial caprina (MSC), resultando em cinco amostras que apresentaram efeito citopático característico do tipo persistente, semelhante ao observado para o CAEV. Uma técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) foi padronizada para amplificar parte do gene gag do genoma pró-viral, codificante para a proteína do capsídeo viral (p25). As cinco amostras foram amplificadas pela PCR e três delas, BR-UFMG/PL1, BR-UFMG/PL2 e BR-UFMG/PL3, foram seqüenciadas diretamente dos seus produtos de PCR. O alinhamento múltiplo das seqüências obtidas com outras de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), obtidas no GenBank, e o dendrograma revelaram que as novas amostras de CAEV são únicas e distintas das demais amostras de LVPR, possuindo maior identidade de nucleotídeos e aminoácidos entre si e com as amostras de CAEV do que com a do vírus maedi-visna.

Highlights

Blood samples from 12 seropositive animals by agar gel immunodifusion test (AGID) showing no evident clinical signs of disease were taken to attempt caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) isolation
Freqüentemente CAEV e MVV são denominados de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR), por possuírem características patogênicas, epidemiológicas e organização genômica semelhantes (Banks et al, 1983)
As amostras amplificadas por polymerase chain reaction (PCR) foram purificadas após eletroforese em gel de agarose de baixo ponto de fusão (“low melting point”) a 1%, por meio do kit de extração1, conforme instruções do fabricante

Summary

MATERIAL E MÉTODOS

De um rebanho caprino do Estado de Minas Gerais, foram obtidas 12 amostras de sangue total de animais soropositivos a anticorpos antiCAEV pela microtécnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA; Gouveia, 1994). Após 24 horas de cultivo à 37oC e em 5% de CO2, o meio foi completamente trocado e os leucócitos foram mantidos, por uma semana, em estufa à 37oC para a maturação dos monócitos em macrófagos (Chebloune et al, 1996). Para as reações de PCR, os iniciadores foram desenhados baseando-se na seqüência publicada de CAEV-Co (Saltarelli et al, 1990), com auxílio dos programas. As amostras amplificadas por PCR foram purificadas após eletroforese em gel de agarose de baixo ponto de fusão (“low melting point”) a 1%, por meio do kit de extração, conforme instruções do fabricante. As seqüências editadas foram analisadas para a determinação de similaridades em relação a nucleotídeos e aminoácidos de amostras de LVPR, utilizando os programas Blastn e Blastx e frente aos bancos de dados nr Seqüência de lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) e seu respectivo número de acesso ao GenBank

RESULTADOS E DISCUSSÃO

SAOMV ZZV

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS