Vergleichende untersuchungen an bohnensaatgut auf befall mit dem erreger der fettfleckenkrankheit, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola(Burkholder) Young et al., mit hilfe verschiedener erfassungsmethoden: I. Nachweis durch isolierung mittels bakteriennährböden und serologische methoden

Abstract

The halo blight of beans is one of the most important seedborne diseases of vegetables. Thus, by ascertainment of the number of bean seeds being attacked or contaminated by the causal agent of this bacteriosis, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, and elimination of lots containing such infested seeds, the transmission can be interrupted. The mostly used methods for testing bean seeds described in literature are compiled. By comparing experiments following results could be obtained: Precultivation of seed samples in tap water containing penicillin G (17,000 IE/l), novobiocin (45 ppm) and cycloheximide (45 ppm) did not enough inhibit the saprophytic organisms frequently occurring in bean seeds; among them Pseudomonas putida and Erwinia herbicola could be identified. However, submerging and shaking of bean seeds in sterile tap water (6 h, 22 °C) allows a sure detection of pathogen cells. Out of 13 media under test, nutrient agar containing saccharose (5%) (NASA), NASA + crystal violet (2 ppm) described by Ercolani and Crosse (1966), King's agar B and a modification of this one (King's agar BF) were most suitable for isolating and identifying colonies of Ps. syringae pv. phaseolicola. On this way still < 102 cells of the causal agent/ml rinsing water can be determined. The pathogen could also be very well discovered by immuno fluorescence technique. By this method the seed rinsing water must contain nearly 105 cells/ml for a exact detection. If collecting samples containing 100 seeds were used, results completely agreeing with the agar test could be obtained. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was also successfully used for identifying the causal agent in rinsing water. By this technique a minimal concentration of 105 cells/ml is necessary for detection. However, testing of collecting samples containing 100 seeds brought the equal results like agar tests. Die Fettfleckenkrankheit der Bohne zählt zu den wichtigsten samenübertragbaren Gemüsekrankheiten. Die Ermittlung des Verseuchungsgrades von Bohnensaatgut mit dem Erreger dieser Krankheit, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, stellt somit eine wichtige Möglichkeit dar, befallenes Saatgut zu eliminieren und so die Infektkette zu unterbrechen. An Hand von Angaben aus der Literatur werden zunächst die Methoden vorgestellt, die bisher zur Untersuchung von Bohnensaatgut beschrieben worden sind. In vergleichenden eigenen Versuchen konnte folgendes festgestellt werden: Eine Vorbebrütung von Saatgutproben in Leitungswasser unter Zusatz von Penizillin G (17000 IE/l), Novobiozin (45 ppm) und Aktidion (45 ppm) bewirkt keine ausreichende Unterdrückung der in Bohnensamen sehr zahlreich vorhandenen saprophytischen Organismen, unter denen u.a. Pseudomonas putida und Erwinia herbicola nachgewiesen werden konnten. Das Einquellen der Bohnensamen in sterilem Leitungswasser (6 h, 22°C) führt dagegen zu einer sicheren Erfassung der Erregerzellen. Unter 13 geprüften Nährmedien eigneten sich Nähragar mit Saccharose- (5%-) Zusatz (NASA), NASA + Kristallviolett (2 ppm) nach Ercolani und Crosse (1966), King's Agar B und eine Modifikation davon (King's Agar BF) am besten zur Isolierung und Identifizierung von Ps. syringae pv. phaseolicola-Kolonien. Auf diese Weise lassen sich noch Erregerkonzentrationen von < 102 Zellen/ml sicher nachweisen. Der Erreger konnte im Einquellwasser auch sehr gut mit Hilfe der Immunfluoreszenztechnik identifiziert werden. Die Nachweisgrenze liegt bei der eingesetzten Methodik im Bereich von 105 Zellen/ml. Bei der Untersuchung von Sammelproben (à 100 Samen) zeigten sich völlig übereinstimmende Resultate mit dem Agartest. Der enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) bewährte sich ebenfalls ausgezeichnet zum Nachweis des Erregers im Einquellwasser. Die Nachweisgrenze liegt auch bei diesem Verfahren bei 105 Zellen/ml. Die Analyse von Sammelproben (à 100 Samen) führt ebenfalls zu Ergebnissen, die völlig identisch sind mit denen des Agartests.