Valproic acid activates autophagy in multiple myeloma cell lines RPMI8226 and U266

Abstract

目的探讨丙戊酸钠对多发性骨髓瘤（MM）细胞株RPMI8226和U266细胞自噬的影响。方法丙戊酸钠处理RPMI8226和U266细胞，吖啶橙染色后采用荧光显微镜观察细胞自噬形态学变化，MTT法检测细胞增殖抑制的变化，流式细胞术检测细胞凋亡，实时定量PCR（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞自噬相关因子LC3、Beclin1的变化。结果荧光显微镜观察到RPMI8226及U266细胞存在基础水平的自噬现象，丙戊酸钠作用后能够诱导细胞自噬增多；MTT法检测结果显示丙戊酸钠对细胞增殖抑制具有时间及浓度依赖性，作用24 h后半数抑制浓度分别为（12.03±0.23）mmol/L和（10.16±0.37) mmol/L。8 mmol/L丙戊酸钠作用24 h后，RPMI8226、U266细胞LC3 mRNA表达水平（22.45±0.07、0.06±0.02）、Beclin1 mRNA表达水平（283.09±17.3、1.53±0.01）与空白对照组（1.00± 0.00、1.00±0.00）比较，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。随着丙戊酸钠浓度增加和作用时间延长，LC3、Beclin1蛋白表达水平逐渐增加，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化率逐渐升高。结论RPMI8226和U266细胞中存在基础水平的自噬现象，丙戊酸钠对MM细胞的自噬有激活作用，这可能是丙戊酸钠治疗MM的机制之一。