Abstract
A transformation protocol using mannose as selective agent was evaluated for genetic transformation of the rootstock Swingle citrumelo. Two independent experiments were carried out to define the smallest mannose concentration capable to inhibit the multiplication of adventitious buds. Based on these results, 5.0 mM of mannose was chosen for Swingle citrumelo genetic transformation. An 11% transformation efficiency was obtained using the Agrobacterium tumefaciens binary strain EHA105. The results described in this study showed that, despite the relatively low transformation frequency, the gene pmi is a good alternative to the most commonly used selection scheme for citrus transformation, based on gene nptII for kanamycin resistance.
Highlights
De modo geral, para aumentar a eficiência dos protocolos de transformação de plantas, um gene marcador é co-introduzido juntamente com o gene de interesse
O ideal é que o gene marcador seja capaz de se expressar em todos os tecidos e em um grande número de espécies vegetais (Herrera-Estrella et al, 1983)
Os genes marcadores de seleção mais amplamente usados incluem o nptII (Bevan et al, 1983), bar (Thompson et al, 1987) e hph (Waldron et al, 1985), codificando neomicina fosfotransferase (NPT), fosfinotricina acetil transferase (PAT), higromicina fosfotransferase (HPT) que conferem resistência a canamicina e outros aminoglicosídeos relacionados, fosfinotricina (PPT)
Summary
Joersbo e Okkels (1996) demonstraram que a manose juntamente com o gene da fosfomanose isomerase (pmi) pode ser utilizada como um agente para a seleção de plantas transgênicas in vitro. O sistema de seleção utiliza o gene pmi de Echerichia coli que codifica para a enzima fosfomanose isomerase (PMI, EC 5.3.1.8) que converte manose-6-fosfato em frutose-6-fosfato que, por sua vez, pode ser utilizada como fonte de carbono por células transformadas. Visando buscar uma alternativa ao uso de genes que confiram resistência a antibióticos, este trabalho teve como objetivos determinar a concentração de manose em meio de cultura para servir como agente de seleção para o porta-enxerto citrumelo Swingle e o estabelecimento de protocolo de transformação genética para esse porta-enxerto usando o gene pmi e manose como agente seletivo
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