Abstract
Objective of the study is to investigate the role of resident plasmids pMT1, pCD1, and pPCP1 in the production of extracellular form of Yersinia pestis lipopolysaccharide (LPS). Materials and methods . The experiments have been performed using Y. pestis strain EV76 (pMT1, pCD1, pPCP1), carrying the whole plasmid set, as well as plasmid-free Y. pestis variant EV76 (pMT1 - , pCD1 - , pPCP1 - ), and isogenic clones, harbouring only one plasmid: Y. pestis EV76 (pMT1); Y. pestis EV76 (pCD1); Y. pestis EV76 (pPCP1). The presence of extracellular LPS in the incubation medium of Y. pestis EV76 cells has been confirmed by supernatant toxicity for laboratory animals and also by LAL-test reaction. Results and conclusions . It has been established that LPS extracellular form is produced by 37 °C Y. pestis EV76 cultures of the initial strain and its variants, carrying pMT1 or pPCP1 plasmid. Plasmid-free cultures and variant harbouring pCPP1 plasmid are deprived of such ability. The results of LAL-test has shown that the process of LPS separation from cell wall membrane into the environment is associated with translocation of proteins encoded by pMT1 and pCD1 plasmids and constitutes a natural form of existence of Y. pestis cells. The involvement of pCD1 plasmid in realization of the toxic potential of Y. pestis LPS has been established for the first time ever.
Highlights
Целью работы является изучение роли резидентных плазмид pMT1, pCD1 и pPCP1в образовании экстрацеллюлярной формы липополисахарида (ЛПС) Yersinia pestis
The presence of extracellular LPS in the incubation medium of Y. pestis EV76 cells has been confirmed by supernatant toxicity for laboratory animals and by LAL-test reaction
It has been established that LPS extracellular form is produced by 37 °C Y. pestis EV76 cultures of the initial strain and its variants, carrying pMT1 or pPCP1 plasmid
Summary
Объектом исследования служил штамм Y. pestis EV76 (pMT1, pCD1, pPCP1). Из него получены бесплазмидный вариант (pMT1–, pCD1–, pPCP1–), а также клоны с одной плазмидой: Y. pestis EV76 (pMT1), Y. pestis EV76 (pCD1), Y. pestis EV76 (pPCP1). При использовании модели биопробных животных бактерии штамма Y. pestis EV76 и его изогенных вариантов с различным набором плазмид выращивали на питательной среде LB (Difco, США) в течение 18 ч при 37 °C. Для перевода ЛПС в токсически активную форму в гемолизированные эритроциты крови человека вносили взвесь бактерий Y. pestis EV76 до конечной концентрации 1–5·1010 м.к./мл и инкубировали 3 ч при 37 °C. В экспериментах с LAL-тестом (набор E-TOXATE Sigma, США) культуры штамма Y. pestis EV76 и его изогенных вариантов с различным набо-. Ром плазмид также выращивали на питательной среде LB (Difco, США) в течение 18 ч при 37 °C. Затем клетки осаждали центрифугированием в течение 10 мин при 8000 об./мин. В полученных супернатантах тестировали ЛПС с помощью LAL-теста в соответствии с прилагаемой инструкцией
Sign-in/Register to view highlights & summary Sign-in/Register to access full text options 
Talk to us
Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have
Schedule a call
