The role of poloxamer 188 for cord blood mononuclear cells into megakaryocytes cultivation and induction in three-dimensional WAVE Bioreactor

Abstract

目的观察泊洛沙姆188（P188）对体外三维（3D）培养诱导脐血单个核细胞向巨核细胞分化的影响。方法将分离的脐血单个核细胞分别接种于细胞瓶和细胞培养袋中，后者采用WIGGENS摇床模拟生物反应器进行3D培养。在巨核细胞诱导培养基中加入P188体外培养14 d，观察细胞形态、计数细胞数并计算细胞存活率，采用流式细胞术观察巨核细胞表面标志表达情况。结果与采用传统的细胞培养瓶二维（2D）培养诱导巨核细胞相比，2D+P188培养组巨核系CD41+、CD41+/CD61+、CD61+细胞数明显增加（P值均<0.01）；在3D培养中加入P188，细胞体积变大，核形状不规则，胞质含紫红色颗粒，细胞分化更接近成熟。2D培养、3D培养及3D+P188培养组组间巨核细胞表面标志CD41、CD41/CD61、CD61表达水平差异有统计学意义（P值均<0.01）。LSD-t检验两两比较显示，与2D培养相比，3D培养诱导巨核细胞存活率及细胞数均降低（P值分别为0.018、0.027），3D+P188培养组细胞数、细胞存活率与2D和3D培养组比较差异均无统计学意义（P值均>0.05）。而3D培养组巨核细胞CD41/CD61表达水平为（36.30±1.27）%，高于2D培养组的（23.95±1.34）%（P=0.002），3D+P188培养组CD41/CD61表达水平更高[（59.45±1.20）%]。结论3D培养有利于巨核系祖细胞诱导分化，但细胞存活率低，加入P188，细胞生存状态好，且诱导效率更高。