The impact of autophagy on proliferation of HEL cells and hematopoietic cells of polycythemia vera patients with JAK2 V617F mutation

Abstract

目的通过检测JAK2 V617F阳性HEL细胞及真性红细胞增多症（PV）患者造血细胞自噬水平，探索自噬调控对HEL细胞及PV患者造血细胞增殖的影响。方法应用流式细胞术、吖啶橙染色法、Western blot法检测JAK2 V617F阳性HEL细胞和12例PV患者造血细胞中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平；通过雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤（3-MA）分别诱导和抑制HEL细胞及3例PV患者骨髓细胞自噬水平，应用上述方法检测细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平的改变，并采用CellTiter-Glo®发光法检测细胞增殖活力。结果HEL细胞内LC3-Ⅱ蛋白的平均荧光强度（159 389±29 001）及自噬体水平明显高于JAK2 V617F阴性K562细胞（96 047±24 134）（P=0.044），PV患者外周血中髓系细胞内LC3-Ⅱ蛋白平均荧光强度（92 842±4 250）明显高于健康志愿者（86 633±2 504）（P=0.001）；自噬诱导剂雷帕霉素作用于HEL细胞和PV患者骨髓细胞12、24、48 h后，各时间点细胞增殖活力与常规培养组相比明显增强，48 h时HEL细胞和PV患者骨髓细胞增殖活力分别为101 413±3 720和18 744±1 015；自噬抑制剂3-MA作用于HEL细胞和PV患者骨髓细胞12、24、48 h后，各时间点细胞增殖活力与常规培养组相比明显减弱，48 h时HEL细胞和PV患者骨髓细胞增殖活力分别为5 732±166和5 371±56。结论JAK2 V617F阳性HEL细胞和PV患者造血细胞存在较高的基础自噬水平，上调自噬活性可促进其增殖；下调自噬活性对其增殖有明显抑制作用。