The effect of up-regulated expression of Rap1GAP on the invasion ability of HL-60 cells in vitro and in vivo

Abstract

目的探讨上调Rap1GAP基因表达对白血病细胞株HL-60细胞体外侵袭能力的影响，并构建白血病动物模型验证体外实验的结果。方法采用实时定量PCR及Western blot法检测已构建的Venus/HL-60细胞（空载体对照组）及Rap1GAP过表达单克隆细胞株Rap1GAP/HL-60(R1、R2)细胞的Rap1GAP表达水平，Transwell方法检测空载体对照组、R1、R2细胞的体外侵袭能力，实时定量PCR检测各组细胞MMP-9 mRNA表达，并通过明胶酶谱法检测MMP-2及MMP-9活性；将4周龄BALB/c裸鼠进行预处理后接种白血病细胞，观察各组裸鼠生存时间及白血病细胞在其脏器中的浸润情况。结果R1、R2细胞的Rap1GAP表达水平分别为空载体对照组的16.2、17.3倍，侵袭率分别为（55±5）%、（59±4）%，显著高于空载体对照组的（14±4）%（P值均<0.001）。R1和R2细胞的MMP-9 mRNA表达水平增加，约为空载体对照组的12.0倍。动物模型实验结果显示接种R1细胞裸鼠（R1组）生存时间为（32.00±1.85）d, R2组为（33.37±2.50）d，空载体对照组为（43.62±2.32）d，R1组和R2组裸鼠生存时间较空载体对照组缩短（P<0.05）。R1组和R2组共有3只裸鼠出现脑膜组织浸润，脑膜组织扩增出Rap1GAP和MMP-9基因，空载体对照组裸鼠各脏器白血病细胞浸润不明显。结论Rap1GAP增强HL-60细胞侵袭能力，同时伴随MMP-9 mRNA表达水平升高，裸鼠体内实验亦证实Rap1GAP提高了HL-60细胞体内侵袭力。