The development and reliability study of high throughput assay for YMDD mutation by pyrosequencing

Abstract

目的 建立基于焦磷酸测序技术的高通量的乙型肝炎病毒YMDD突变临床检测方法.方法应用专用的YMDD突变区域的扩增引物,经PCR扩增及磁珠分离,制备YMDD区焦磷酸测序单链模板,并在PSQ96A焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,应用标准的YMDD区突变质粒作为阳性对照模板和标准品,观察批量分析的可靠性并初步批量检定90例临床血清标本.结果建立了基于焦磷酸测序技术的YMDD突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.能一次获得90人份的YMDD突变临床检测结果.经标准的YMDD突变质粒及血清标本的重复性及可靠性检测,质粒标准品的突变检出率及重复率均达100%,而血清标本达98.8%.结论本方法可准确.高通量、快速检测YMDD区突变,特别适宜临床批量检测需要。