The anti-proliferative and anti-inflammatory mechanisms of JAK1 inhibitor SHR0302 versus Ruxolitinib in SET2 cell line and primary cells

Abstract

目的探究选择性JAK1抑制剂SHR0302和芦可替尼对骨髓增殖性肿瘤（MPN）细胞株SET2细胞和MPN患者原代细胞的影响以及分子作用机制。方法CCK8法检测不同浓度SHR0302和芦可替尼对SET2细胞增殖能力的影响；集落形成实验检测SHR0302和芦可替尼对MPN患者原代细胞红系爆式集落形成单位（BFU-E）的作用；多因子检测试剂盒MSD检测SHR0302和芦可替尼对SET2细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8、IL-12p70蛋白表达水平的影响；以Western blot法检测SHR0302和芦可替尼对SET2细胞JAK-STAT信号通路分子磷酸化水平的影响。结果0.1、1.0、2.5、5.0 µmol/L SHR0302作用SET2细胞24、48、72 h，细胞增殖抑制率随药物浓度的增大而增高（P< 0.001）；0.01、0.05、0.10 µmol/L芦可替尼作用SET2细胞48、72 h，细胞增殖抑制率亦随药物浓度的增大而增高（P<0.001），且均在72 h抑制作用最显著。2.5 µmol/L SHR0302、0.1 µmol/L芦可替尼作用SET2细胞72 h，细胞增殖抑制率分别为（59.94±0.60）％、（64.00±0.66）％，提示SHR0302的增殖抑制作用弱于芦可替尼。与对照组比较，0.1、1.0、5.0 µmol/L SHR0302和0.1、0.2、0.4 µmol/L芦可替尼均浓度依赖性地抑制MPN患者BFU-E形成，1.0 µmol/L SHR0302对MPN患者BFU-E集落形成抑制程度与0.2 µmol/L芦可替尼相当。除IL-12外，1.6 µmol/L SHR0302作用SET2细胞24 h可明显抑制炎性介质蛋白IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8表达（P<0.01），与1.0 µmol/L芦可替尼对炎性介质抑制作用相当。不同浓度SHR0302作用SET2细胞3 h后JAK-STAT信号通路显著抑制，在1.0 µmol/L时可显著抑制p-STAT1（Tyr701）、p-STAT3（Tyr705）蛋白磷酸化，在5.0 µmol/L时可使p-JAK1（Tyr1022/1023）、p-STAT5（Tyr694）蛋白磷酸化水平明显下调（P<0.05），而芦可替尼在0.1 µmol/L即可明显抑制下游STAT蛋白磷酸化水平。结论SHR0302能有效抑制MPN细胞株和患者原代细胞的增殖以及炎性因子表达，其机制可能与下调p-JAK1及其下游p-STAT1、p-STAT3、p-STAT5蛋白磷酸化水平相关，但其抗增殖、抗炎作用弱于芦可替尼。