Abstract

The results of in vitro hematopoiesis studies have provided most of the knowledge about the organization, regulation, and development of the human hematopoietic system over the past three to four decades. However, due to the impossibility of an appropriate assessment of hematopoietic stem cells (HSC) in humans and because of the shortcomings of methodological approaches to determining the role of hematopoietic progenitor cells in the pathogenesis of MDS and to predicting the course of the pathological process, semiliquid agar cultures of bone marrow from patients with myelodysplastic syndrome were used. Myelodysplastic syndrome (MDS) refers to a clinically, morphologically, and genetically heterogeneous group of diseases characterized by clonalism and arising from mutations at the level of hematopoietic progenitor cells. Proliferation of such a mutated stem cell progenitors leads to ineffective maturation of myeloid lineage cells and dysplastic changes in the bone marrow (BM). The aim of the study was to establish the relationship between the functional activity of hematopoietic progenitor cells in the ex vivo culture and the activity of the pathological process in the myelodysplastic syndrome. We studied bone marrow samples from patients with the myelodysplastic syndrome, namely refractory anemia with excess blasts I (MDS RAEB I) and refractory anemia with excess blasts II (MDS RAEB II) and AML under conditions in vitro, as well as their clinical laboratory data. It was found that the percentage of blasts and myeloblasts in the samples of patients with AML and MDS RAEB II increased, compared to the samples of patients with MDS RAEB I (63.5±3.9 %, 18.05±1.01 % and 9.49±1.53 % respectively). An increase in the number of erythrocytes and hemoglobin content was noted in the group of patients with MDS RAEB I compared with MDS RAEB II (2.9±1.4×1012 / l and 105.04±3.6 g / l versus 9±0.8×1012 / l and 84.5±4.8 g / l, respectively). The analysis of the results of BM studies of patients with MDS in in vitro culture indicated a significant lag in the formation of cell aggregates during cultivation and a pronounced inhibition of the colony-forming ability of progenitor cells, compared to the control. A noticeable decrease in the colony-forming ability was observed in patients with MDS RAEB I, MDS RAEB II and AML in this sequence – 4.1±1.2 per 1×105 explanted cells, 3.2±0.9 per 1×105 explanted cells and 2.0±0.6 per 1×105 explanted cells, respectively. The analysis of hematological parameters and the results of BM cells cultivation at different stages of MDS indicates that the colony-forming ability of progenitor cells correlates with the depth of the pathological process.

Highlights

  • Результати досліджень кровотворення in vitro забезпечили протягом останніх трьох-чотирьох десятиліть більшу частину знань про організацію, регулювання та розвиток системи кровотворення людини

  • Які свідчать, що компартмент клітин-попередників відіграє значну роль у дотримуванні та прогресії лейкемічного процесу [2,3]

  • Проте немає вичерпних даних про особливості їх функціонування у хворих із різним ступенем ризику трансформації Мієлодиспластичний синдром (МДС) у гостру лейкемію

Read more

Summary

Матеріали та методи дослідження

У роботі проаналізовано дані хворих на МДС, які перебували на лікуванні або на обстеженні у відділенні захворювань системи крові та в консультативній поліклініці ДУ «Інститут гематології та трансфузіології НАМН України» в першому та другому відділеннях Київської міської клінічної лікарні No 9. Загалом у дослідження увійшло 29 хворих на МДС, із них у групу первинно верифікованого МДС РАНБ І включено 16 пацієнтів, у групу з первинно діагностованим МДС РАНБ ІІ – 11 осіб та 2 пацієнти з ГМЛ, що трансформувався з МДС. Для встановлення діагнозу поряд з клінічними даними враховували результати цитоморфологічних досліджень периферичної крові з визначенням вмісту гемоглобіну, кількості еритроцитів, лейкоцитів, тромбоцитів та підрахунком лейкограми у забарвлених мазках за методом Май-Грюнвальда – Гімзи. Зразок розводили у співвідношенні 1:3 з розчином PBS (Sigma-Aldrich, США) та нашаровували на Histopaque (Gibco, СШA) щільністю 1,077 г/мл, центрифугували протягом 30 хв за 740 g. З отриманого зразка виділяли фракцію мононуклеарів та тричі відмивали шляхом центрифугування протягом 10 хв за 430 g у розчині PBS. Очищену фракцію розводили у середовищі DMEM (Sigma, США) та здійснювали підрахунок клітин меланжерним методом у камері Горяєва. Достовірність відмінностей середніх значень двох сукупностей визначали із застосуванням U-критерію Манна – Уітні; різницю результатів вважали достовірною на рівні значущості 95 % (p < 0,05)

Результати та їх обговорення
Список літератури
Full Text
Published version (Free)

Talk to us

Join us for a 30 min session where you can share your feedback and ask us any queries you have

Schedule a call