Synergistic effect of IL-1β siRNA combined with mesenchymal stem cells in treatment of acute liver failure in mice

Abstract

目的：构建白介素（interleukin,IL）-1βsiRNA腺病毒载体并评估其联合骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）移植治疗急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的协同作用.方法：构建IL-1βsiRNA腺病毒载体并体外验证其对IL-1β的的抑制能力;体内实验筛选IL-1βsiRNA腺病毒载体的最佳干扰计量和最佳干扰时间点并检测其免疫源性;分离培养Balb/c小鼠骨髓MSC并进行鉴定,慢病毒稳定转染GFP;20%（v/v）四氯化碳（CCl4）橄榄油溶液8μg/L腹腔注射诱导小鼠ALF模型.100只小鼠随机分为5组：正常对照组（n=20）;ALF组（n=20）;ALF＋IL-1βsiRNA组（n=20）;ALF＋MSC组（n=20）;ALF＋IL-1βsiRNA＋MSC组（n=20）.各组小鼠行干预后检测肝功能、生存率、血清炎症因子水平、组织病理学改变、肝细胞凋亡、增殖和肝脏中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）含量.免疫组织化学和荧光显微镜观察肝脏组织切片中GFP阳性细胞.结果：分离获取的MSC表达CD45阴性、CD44阳性、CD90阳性和CD29阳性.IL-1βsiRNA腺病毒载体在体外能够抑制脂多糖刺激后的Raw264.7细胞株分泌IL-1β.qPCR实验显示腺病毒剂量为1×10^8 pfu、注射36 h后时体内干扰效率最高.尾静脉注射1×10^8 pfu腺病毒空载体4 h后,血清中干扰素（interferon,IFN）-γ、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α和IL-6水平无明显升高.联合治疗组CXCL1、IL-1β、IL-10、IL-6、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）水平与单纯MSC组相比具有统计学差异,但与IL-1βsiRNA组相比无统计学差异;联合治疗组在促进肝细胞增殖、降低肝细胞凋亡、分泌VEGF和HGF水平上与IL-1βsiRNA组或者MSC组相比均具有统计学差异;免疫组织化学及荧光显微镜显示联合治疗组存活MSC数量比MSC组明显增多,具有统计学�