Standardization of a multiplex PCR technique for the detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serogroups O157, O104 and "big six"

Abstract

Los serogrupos O26, O45, O103, O104, O111, O121, O145 y O157 de STEC se relacionan con un elevado numero de casos de SUH a nivel mundial, por lo que estan incluidos dentro de las categorias de mayor riesgo para los humanos, segun los criterios de autoridades alimentarias de Estados Unidos y Europa. El metodo convencional de identificacion de antigenos O y H se realiza por aglutinacion con antisueros de conejo. Este metodo ademas de ser muy costoso y laborioso, no se encuentra disponible en el pais para empleo masivo. En este contexto, el objetivo de este estudio observacional descriptivo de corte transverso ha sido la estandarizacion de una tecnica de PCR multiple para la deteccion de estos 8 serogrupos, a fin de contar con un sistema de deteccion eficiente, sensible y con potencial de aplicacion en la industria alimentaria. Se estandarizaron reacciones de PCR empleando como controles positivos cepas E. coli de referencia correspondientes a la totalidad de los serogrupos citados. Se obtuvieron productos de tamanos esperados para cada serogrupo, no se observaron amplificaciones cruzadas o falsos positivos. Esta tecnica estandarizada podria representar una herramienta rapida y menos costosa que la tecnica serologica, con la capacidad de ser aplicada a diferentes matrices, permitiendo la deteccion de estos serogrupos en aislados STEC de ganado en pie, fuentes de agua de consumo, alimentos e incluso en aislamientos clinicos asociados a enfermedades humanas.