SiRNA-mediated silencing of the CXCR4 gene down-regulates MMP-9 expression in EC-9706 cells

Abstract

目的：探讨在食管鳞癌EC-9706细胞中沉默CXCR4基因对MMP-9基因表达的影响,为阐明CXCR4基因在食管鳞癌侵袭转移中的作用提供实验依据.方法：化学合成2条靶向CXCR4基因的siRNA1和siRNA2,同时设立荧光标记阴性对照和空白对照.脂质体法转染入EC-9706细胞,荧光显微镜下观察转染效率.转染48h后,半定量RT-PCR检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞CXCR4和MMP-9基因蛋白表达的变化,侵袭小室检测各组细胞穿膜细胞数的变化,MTT检测各组细胞的A值.结果：与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞CXCR4mRNA和蛋白的表达明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;同时与阴性对照和空白对照相比,转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达同样明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞穿膜细胞数与阴性对照和空白对照相比明显下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）;MTT结果显示转染CXCR4siRNA1和siRNA2组细胞增殖能力下降,与阴性对照和空白对照相比差异具有统计学意义（P〈0.05）.结论：在食管鳞癌EC9706中存在CXCR4基因对MMP-9基因的调控作用,CXCR4基因有可能通过调控MMP-9基因的表达参与食管鳞癌细胞的浸润转移,CXCR4有可能成为食管鳞癌基因治疗的有效靶点.