Rh Haemolytic Disease of the Newborn and Rh genotyping by RFLP - and allele-specific — PCR

Abstract

Resume L'identification du systeme de groupe sanguin RH est associee a la premiere description du phenomene d'incompatibilite fœtomaternelle responsable de la maladie hemolytique du nouveau-ne. Le systeme RH est extremement polymorphe, mais parmi les 48 antigenes serologiquement identifies, les mieux connus sont les antigenes D, C, c, E et e. Selon la presence ou l'absence de l'antigene majeur RhD sur la membrane des erythrocytes, les cellules sont dites Rh-positives (RH+) ou Rh-negatives (RH−). Le locus RH, localise sur le chromosome 1, est compose de deux genes fortement homologues (92 % d'identite), RHD et RHCE , l'un codant pour l'antigene D et l'autre a la fois pour les polypeptides C/c et E/e vraisemblablement par un mecanisme d'epissage alternatif. La presence ou l'absence du gene RHD constituent la base genetique du polymorphisme de groupe sanguin Rh+/Rh−. Le sequencage des transcrits specifiques du gene RHD et des differents alleles du gene RHCE a permis de definir les bases moleculaires qui determinent les specificites D, C, c, E et e. Sur la base de polymorphismes nucleotidiques ainsi mis en evidence, des oligonucleotides « allele-specifiquesont ete synthetises pour permettre de detecter par PCR sur de l'ADN fœtal la presence du gene RHD et des alleles RHc et RHE dans les situations a risque ou les meres sont respectivement immunisees contre les antigenes D, c et E. Cette methode diagnostique s'avere particulierement utile dans le cas de l'incompatibilite anti-RhD qui constitue la principale cause d'anemie hemolytique severe, laquelle, en l'absence de traitement transfusionnel in utero , conduit generalement a la mort fœtale. En effet, alors que la detection de cette incompatibilite necessitait jusqu'a present la realisation de multiples amniocenteses voire de cordocenteses, avec les risques attenants, le typage Rh+/Rh− de l'ADN fœtal ne necessite qu'une seule amniocentese avec un prelevement de tres faible quantite. Ce test PCR etant realise precocement au cours de la grossesse permet de plus d'eviter chez les meres Rh− porteuses de fœtus Rh− la repetition inutile d'examens prenataux ainsi que l'injection inadaptee d'immunoglobines anti-RhD. D'autre part, d'apres la base genetique du polymorphisme Rh+/Rh−, un genome homozygote pour le gene RHD contient 2 copies de ce gene et 2 copies du gene RHCE , tandis qu'un genome heterozygote pour le gene RHD contient 1 copie de ce gene pour 2 copies du gene RHCE . Ainsi, le genotype Dd ou DD d'un donneur peut etre facilement determine par « Southern bloten comparant les intensites relatives des fragments de restriction specifiques des genes RHD et RHCE apres hybridation avec une sonde ADNc Rh. Cette information s'avere tres utile pour le conseil genetique dans le cas ou une femme hyperimmunisee contre l'antigene D, et ayant deja subi plusieurs fausses couches, veut savoir si son partenaire est Rh positif homozygote ou heterozygote avant d'envisager une nouvelle grossesse.