Abstract
El parásito intracelular Leishmania braziliensis es el agente causal de la leishmaniasis cutánea, enfermedad endémica de zonas tropicales, cuyos tratamientos farmacológicos son tóxicos y para la cual no se dispone de una vacuna en la actualidad. Por esta razón, el estudio de las proteínas relacionadas con el metabolismo energético del parásito es relevante dada su importancia para la supervivencia del mismo. En este estudio, utilizando como secuencia plantilla los primeros 18 residuos del extremo N-terminal de la proteína nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenilil transferasa de L. braziliensis (Lb-NMNAT), se sintetizaron péptidos implementando la estrategia Fmoc/tert-Butilo en una resina Rink amida MBHA. Los péptidos se purificaron por cromatografía en columna C18 y se caracterizaron mediante RP-HPLC. La proteína recombinante 6xHisLb-NMNAT se expresó en células Escherichia coli M15 y se purificó parcialmente empleando cromatografía de afinidad a metales inmovilizados. De esta proteína se confirmó su actividad enzimática a través de ensayos enzimáticos directos analizados por RP-HPLC. Los péptidos sintetizados se utilizaron para evaluar su efecto sobre la actividad enzimática de la proteína 6xHisLb-NMNAT, observándose una modulación diferencial, lo cual resulta promisorio para el diseño de herramientas quimioterapéuticas basadas en la secuencia N-terminal de la proteína Lb-NMNAT.
Highlights
O parasita intracelular Leishmania braziliensis é o agente causador da leishmaniose tegumentar, doença endêmica nos trópicos, cujos tratamentos farmacológicos são tóxicos e para a qual não existe vacina atualmente
Las medidas de manejo existentes dependen del uso de fármacos tóxicos derivados de antimonio para combatir la infección y del control del vector para reducir la transmisión [1, 2]
Debido a ello y a la ausencia de vacunas en humanos disponibles en la actualidad para combatir este parásito, el estudio de las proteínas implicadas en el metabolismo energético, indispensable para la supervivencia de este organismo, es de gran interés
Summary
Se realizó la síntesis de los péptidos en fase sólida, utilizando una estrategia Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo) tert-Butilo en una resina. Rink amida MBHA, con aminoácidos protegidos Fmoc/tBu [16], en una escala de síntesis de 9 μmoles, llevando a cabo la desprotección de cada residuo con una solución de piperidina (4-metil-piperidina) al 25% en N,N-dimetilformamida (DMF) y 0,1% de Tritón X 100. Como solvente se empleó una solución de diclorometano y DMF, con constante agitación a temperatura ambiente y un tiempo de reacción de 15 h. Se precipitó el péptido con éter etílico frío y se centrifugó para obtener el precipitado. Posteriormente, se lavó con éter etílico (5X) y se dejó secando a temperatura ambiente toda la noche y finalmente se resuspendió en agua
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